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放射免疫分析試劑

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2005-11-18
 

1、標(biāo)準(zhǔn)品

  標(biāo)準(zhǔn)品是放射免疫分析法定量的依據(jù),由于以標(biāo)準(zhǔn)品的量用來表示被涮物質(zhì)的量,故標(biāo)準(zhǔn)品與被測物質(zhì)應(yīng)當(dāng)化學(xué)結(jié)構(gòu)一致并具有相同免疫活性。標(biāo)準(zhǔn)品作為定量的基準(zhǔn)。應(yīng)要求高度純化。標(biāo)準(zhǔn)品除含量應(yīng)具有準(zhǔn)確性外,還應(yīng)具備穩(wěn)定性,即在合理的貯存條件下保持原來的特性。

  按實驗要求,將標(biāo)準(zhǔn)品用緩沖液配成含不同劑量的標(biāo)準(zhǔn)溶液,用于制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2、標(biāo)記物

  標(biāo)記抗原應(yīng)具備:①比放射性高,以保證方法的靈敏度;②免疫活性好;③所用的核素的半衰期盡可能長,標(biāo)記一次可較長時間使用,這對來之不易的抗原尤其重要;④標(biāo)記簡便、易防護(hù)。

  要準(zhǔn)確測量B與F的放射性,必須有足夠的放射性強(qiáng)度。所選用的標(biāo)記抗原的量,在使用125I時達(dá)5000~15000cpm。

3、抗體

  應(yīng)選擇特異性高、親和力強(qiáng)及滴度好的抗體,用于放射免疫測定。

  根據(jù)稀釋曲線,選擇適當(dāng)?shù)南♂尪,一般以結(jié)合率為50%作為抗血清的稀釋度。

4、B與F分離劑

  以2%加膜活性炭溶液為例,2%加膜活性炭溶液的配制:

  活性炭2g(杭州木材廠生產(chǎn),森工牌732型)

  右旋糖酐T200.2g

  加0.1mol/L PB 至100ml

  電磁攪拌1h,然后置于變通冰箱冰箱待用。

5、緩沖液

  放射免疫分析技術(shù)所用的緩沖液有多種,要通過實驗選用抗體和抗原結(jié)合最高的緩沖液。

  目前最常用的緩沖液有下列幾種:①磷酸鹽緩沖液;②醋酸鹽緩沖液;③巴比妥緩沖液;④Tris –HCl緩沖液;⑤硼酸緩沖淮。其中以磷酸鹽緩沖液應(yīng)用最多。

  在緩沖液中,除必須有弱酸及弱酸的鹽成分外,還應(yīng)根據(jù)不同檢測項目加入下列物質(zhì):①保護(hù)蛋白:常用的有牛血清白蛋白或白明膠,濃度為0.1%~0.2%,用以降低試管對抗原的非特異性吸附。②防腐劑:多采用0.1%疊氮鈉、0.01%柳硫汞、溶菌酶或抗菌素。③酶抑制劑:如測定心鈉素等肽類激素時,要加入適量的抑肽酶,用以抑制血漿內(nèi)源性水解酶對待測物的降解;又如測定cAMP、cGMP時,需加入EDTA·2Na,抑制磷酸二酯酶的活性。④阻斷劑:在測定甲狀腺激素或測定某些甾體激素時,必須加阻斷劑,使和蛋白質(zhì)相結(jié)合的激素,變?yōu)橛坞x型。常用的阻斷劑有8—苯胺—1—萘磺酸、柳硫汞、水楊酸鈉、三氯醋酸鈉等。⑤載體蛋白:采用二抗作B與F分離劑時,要向反應(yīng)液中加入適量與第一抗體同種動物的正常血清。在測定不含有血漿蛋白的樣品時,用PEG沉淀劑分離B、F,必須加適量γ球蛋白或正常人混合血清。

  在神經(jīng)肽的RIA時,常用PELH緩沖液,(按1000ml,pH7.6):

  0.1mol/l PB        980.0ml

  0.3mol/L EDTA·2Na     10.0ml

  0.2%洗必泰溶液       10.0ml

  溶菌酶           1.0g

 
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