無(wú)菌室的要求:
1、需要建立無(wú)菌室管理制度。
2、保持良好的衛(wèi)生:相對(duì)濕度40%---60%,溫度20—22 ℃,最好安裝空調(diào)。
3、無(wú)菌室不得進(jìn)行其他工作,非操作所使用的物件一律不得放入,檢后的余樣不得存放。
4、紫外燈的使用期限一般為300小時(shí),要記錄使用時(shí)間,到期更換。
無(wú)菌操作及要求
以菌落總數(shù)、大腸菌群為例演示無(wú)菌實(shí)驗(yàn)流程
對(duì)實(shí)驗(yàn)臺(tái)、手、檢驗(yàn)用具進(jìn)行消毒(保證無(wú)菌環(huán)境和無(wú)菌實(shí)驗(yàn)用品),微生物的理想環(huán)境是無(wú)菌,但是更應(yīng)該做好防護(hù),保護(hù)自己。防護(hù)衣服,口罩手套必須佩帶。
對(duì)實(shí)驗(yàn)的臺(tái)面進(jìn)行擦拭消毒,一般用75%乙醇或新潔爾滅溶液。
為保持無(wú)菌的進(jìn)行,對(duì)手心手腕這些容易殘留細(xì)菌的部位進(jìn)行消毒處理。
實(shí)驗(yàn)臺(tái)上面的藥品、盛裝樣品的盒子等實(shí)驗(yàn)用工具要進(jìn)行消毒處理。
實(shí)驗(yàn)前對(duì)培養(yǎng)基的檢查、無(wú)菌條件下稱樣
1)實(shí)驗(yàn)前檢查大腸菌群培養(yǎng)基的量、導(dǎo)氣管內(nèi)是否有氣泡。
2)開(kāi)啟超凈臺(tái)風(fēng)機(jī)、在無(wú)菌、空氣緩慢流動(dòng)狀態(tài)下工作。
3)進(jìn)行無(wú)菌稱樣,這一步其實(shí)最好是要佩帶手套的。
4)接種針滅菌
5)接菌試管口滅菌
6)取菌
在接種或向培養(yǎng)皿內(nèi)倒培養(yǎng)基時(shí),試管口或瓶壁外面不要接觸皿底,試管或瓶口應(yīng)傾斜一下在火焰上通過(guò)。
總結(jié)
微生物實(shí)驗(yàn)室工作人員,必須有嚴(yán)格的無(wú)菌觀念,許多實(shí)驗(yàn)要求在無(wú)菌的條件下進(jìn)行,主要原因:
一是防止試驗(yàn)操作中人為污染樣品;
二是保證工作人員安全,防止檢出的致病菌由于操作不當(dāng)造成個(gè)人污染。
要求如下:
無(wú)菌室使用與管理要求
1.工作室應(yīng)矮小、平整,面積小,高2.2-2.3米,內(nèi)部裝修應(yīng)平整、光滑,無(wú)凹凸不平或棱角等,四壁及屋頂應(yīng)用不透水之材質(zhì),便于擦洗及殺菌。
2.室內(nèi)采光面積大,從室外應(yīng)能看到室內(nèi)情況。
3.為保證無(wú)菌室的潔凈,無(wú)菌室周圍需設(shè)緩沖走廊,走廊旁再設(shè)緩沖間,其面積可小于無(wú)菌室。
4.無(wú)菌室、緩沖走廊及緩沖間均設(shè)有日光燈及供消毒空氣用紫外燈,殺菌紫外燈離工作臺(tái)以1米為宜 ,其電源開(kāi)關(guān)均應(yīng)設(shè)在室外。
5.無(wú)菌室與緩沖間進(jìn)出口應(yīng)設(shè)拉門,門與窗平齊,門縫要封緊,兩門應(yīng)錯(cuò)開(kāi),以免空氣對(duì)流造成污染。
6.無(wú)菌室的使用與管理
(1) 無(wú)菌室應(yīng)保持清潔整齊,室內(nèi)僅存放必須的檢驗(yàn)用具如酒精燈、酒精棉、火柴、鑷子、接種針、接種環(huán)等。不要放與檢測(cè)無(wú)關(guān)的物品
(2) 室內(nèi)檢驗(yàn)用具及凳桌等保持固定位置,不隨便移動(dòng)。
(3) 每2-3周用2%石炭酸水溶液擦拭工作臺(tái)、門、窗、桌、椅及地面,然后用3%石炭酸水溶液噴霧消毒空氣,最后紫外燈殺菌半小時(shí)。
(4) 定期檢查室內(nèi)空氣無(wú)菌狀況,細(xì)菌數(shù)應(yīng)控制在10個(gè)以下,發(fā)現(xiàn)不符合要求時(shí),應(yīng)立即徹底消毒滅菌。無(wú)菌室無(wú)菌程度的測(cè)定方法:取普通肉湯瓊脂平板、改良馬丁培養(yǎng)基平板各3個(gè)(平板直徑均9厘米),置無(wú)菌室各工作位置上,開(kāi)蓋曝露半小時(shí),然后倒置進(jìn)行培養(yǎng),測(cè)細(xì)菌總數(shù)應(yīng)置37℃溫箱培養(yǎng)48小時(shí);測(cè)霉菌數(shù)則應(yīng)置27℃溫箱培養(yǎng)5天。細(xì)菌、霉菌總數(shù)均不得超過(guò)10個(gè)為合格 。
(5) 無(wú)菌室殺菌前,應(yīng)將所有物品置于操作之部位(待檢物例外),然后打開(kāi)紫外燈殺菌30分鐘,時(shí)間一到,關(guān)閉紫外燈待用。
(6) 進(jìn)入無(wú)菌室前,必須于緩沖間更換消毒過(guò)的工作服、工作帽及工作鞋。
(7) 操作應(yīng)嚴(yán)格按照無(wú)菌操作規(guī)定進(jìn)行,操作中少說(shuō)話,不喧嘩,以保持環(huán)境的無(wú)菌狀態(tài)。
器材及場(chǎng)所的滅菌消毒
微生物檢驗(yàn)用器材及場(chǎng)所必須進(jìn)行滅菌或消毒處理,不同的對(duì)象采用不同的處理方法。
1. 高壓蒸汽滅菌: 工作服、口罩、稀釋液等,置高壓殺菌鍋內(nèi),一般采用121℃滅菌半小時(shí),當(dāng)然不同的培養(yǎng)基有不同的要求,應(yīng)分別處理。
2. 火焰滅菌: 接種針、接種環(huán)等可直接火焰滅菌。
3. 高溫干燥滅菌: 各種玻璃器皿、注射器、吸管等,置于燥箱中160℃滅菌2小時(shí)。
4. 一 般消毒: 無(wú)菌室內(nèi)的凳、工作臺(tái)、試管架、天平、待檢物容器或包裝均無(wú)法進(jìn)行滅菌,必須用其他方法進(jìn)行消毒處理,采用2%石炭酸或來(lái)蘇兒水溶液擦拭消毒,工作人員的手也用此法進(jìn)行消毒。
5. 空氣的消毒: 開(kāi)啟紫外燈照射30-60分鐘 即可。
準(zhǔn)備工作
1. 先進(jìn)行無(wú)菌室空間的消毒,開(kāi)啟紫外燈30-60分鐘。
2. 檢驗(yàn)用的有關(guān)器材, 搬入無(wú)菌室前必須分別進(jìn)會(huì)滅菌消毒。
3. 操作人員必須將手清洗消毒,穿戴好無(wú)菌工作衣、帽和鞋,才能進(jìn)入無(wú)菌室。
4. 進(jìn)入無(wú)菌室后再一次消毒手部,然后才進(jìn)行檢驗(yàn)操作。
操作過(guò)程注意事項(xiàng)
1. 動(dòng)作要輕,不能太快,以免攪動(dòng)空氣增加污染;玻璃器皿也應(yīng)輕取輕放,以免破損污染環(huán)境。
2. 操作應(yīng)在近火焰區(qū)進(jìn)行。
3. 接種環(huán)、接種針等金屬器材使用前后均需灼燒,灼燒時(shí)先通過(guò)內(nèi)焰,使殘物烘干后再灼燒滅菌。
4. 使用吸管時(shí),切勿用嘴直接吸、吹吸管,而必須用洗耳球操作。
5. 觀察平板時(shí)不好 開(kāi)蓋,如欲沾取菌落檢查時(shí),必需靠近火焰區(qū)操作,平皿蓋也不能 大開(kāi),而是上下蓋適當(dāng)開(kāi)縫。
6. 進(jìn)行可疑致病菌涂片染色時(shí),應(yīng)使用夾子夾持玻片,切勿用手 直接拿玻片,以免造成污染,用過(guò)的玻片也應(yīng)置于消毒液中浸泡消毒,然后再洗滌。
7. 工作結(jié)束,收拾好工作臺(tái)上的樣品及器材,最后用消毒液擦拭工作臺(tái)。