建立止喘口服液中鹽酸麻黃堿的含量測定法。方法:采用高效液相色譜法,選用Kromasil C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)色譜柱;流動(dòng)相為乙腈?0.1%磷酸溶液(10∶90,V/V);檢測波長:207 nm;流速0.7 mL/min;進(jìn)樣量20 μL;柱溫:室溫。結(jié)果:鹽酸麻黃堿在4.5~27.0 mg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r=0.999 8,n=6),平均回收率為98.99%,RSD為0.96%。結(jié)論:本法簡便快捷、靈敏,結(jié)果準(zhǔn)確,可用于止喘口服液中鹽酸麻黃堿的質(zhì)量控制。
1 材料SHIMDZU高效液相色譜儀,SPD?10A紫外檢測器,Class?vp色譜工作站(日本島津),鹽酸麻黃堿對照品(中國藥品生物制品檢定所,含量測定用,批號171242?200405),止喘口服液[批準(zhǔn)文號:贛藥制字(2004)第H0304號,江西省兒童醫(yī)院制劑室自制];乙腈為色譜純,磷酸為分析純,水為純化水。
2 方法與結(jié)果2.1 色譜條件色譜柱:Kromasil C18(250 mm×4.6 mm,5 μm),流動(dòng)相:乙腈?0.1%磷酸溶液(10∶90,V/V);檢測波長:207 nm;流速0.7 mL/min;柱溫:室溫;進(jìn)樣量20 μL。在此條件下鹽酸麻黃堿與其它組分能達(dá)到基線分離,理論塔板數(shù)按鹽酸麻黃堿計(jì)算應(yīng)不低于6 000。
2.2 溶液的制備2.2.1 對照品溶液 精密稱取105 ℃干燥至恒重的鹽酸麻黃堿對照品適量,加流動(dòng)相制成15 mg/L的溶液,作為儲備液,備用。
2.2.2 供試品溶液 精密量取止喘口服液2 mL,置于25 mL量瓶中,加流動(dòng)相稀釋至刻度,搖勻。用0.45 μm微孔濾膜過濾。精密量取續(xù)濾液2 mL,置于10 mL量瓶中,用流動(dòng)相稀釋至刻度,搖勻,即得。
2.2.3 陰性對照液 按處方比例及工藝,制備缺鹽酸麻黃堿的陰性樣品,再按供試品溶液的制備方法制備不含鹽酸麻黃堿的陰性樣品溶液。
2.3 系統(tǒng)適應(yīng)性及專屬性考察分別吸取對照品溶液、供試品溶液及陰性對照品溶液各20 μL注入高效液相色譜儀,陰性對照品在鹽酸麻黃堿峰位置處無吸收峰,即其它成分對測定無干擾,鹽酸麻黃堿峰與其它組分峰基線分離良好,見圖1,對照品溶液及供試品溶液主峰的保留時(shí)間一致,保留時(shí)間約13 min。
2.4 線性關(guān)系考察精密吸取對照品儲備液適量,用流動(dòng)相稀釋至4.5、9.0、13.5、18.0、22.5、27.0 mg/L 6個(gè)不同濃度,在上述色譜條件下,精密量取以上溶液各20 μL,注入。
液相色譜儀,以峰面積Y對濃度X進(jìn)行線性回歸,回歸方程為Y=58 647.6X 20 917.1,r=0.999 8,n=6,在4.5~27.0 mg/L濃度范圍內(nèi)峰面積對濃度的線性關(guān)系良好。
2.5 進(jìn)樣精密度試驗(yàn)精密量取15 mg/L的對照品儲備液0.18 mL,于100 mL量瓶中,用流動(dòng)相稀釋至刻度,得濃度為0.027 mg/mL鹽酸麻黃堿對照品溶液,在上述色譜條件下,取上述溶液20 μL,重復(fù)進(jìn)樣5次,以峰面積計(jì)算精密度,測得鹽酸麻黃堿峰面積值為1 609 964、1 591 984、1 610 760、1 616 328、1 620 406,RSD為0.68%,表明精密度良好。
2.6 重復(fù)性試驗(yàn)取同一批口服液5份,按“2.2.2”項(xiàng)下供試品處理方法處理樣品,按上述色譜條件測定,測得樣品鹽酸麻黃堿含量分別為12.14、12.54、12.51、12.60、12.78 mg/L,RSD為0.12%,表明重復(fù)性良好。
2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一供試品溶液,分別于0、2、4、8、12 h進(jìn)行測定,其含量RSD為0.15%,表明12 h內(nèi)測定結(jié)果基本穩(wěn)定。
2.8 加樣回收試驗(yàn)精密移取已知含量的樣品9份,分別加入高、中、低3個(gè)濃度的鹽酸麻黃堿對照品各3份,在上述色譜條件下,每次進(jìn)樣20 μL,注入高效液相色譜儀。
2.9 樣品測定取4批次樣品,按供試品溶液的制備方法制備,另精密稱取鹽酸麻黃堿對照品適量,配成一定的濃度(13.44 mg/L),分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各20 μL,按上述色譜條件測定,記錄色譜圖,按外標(biāo)法計(jì)算含量。
3 討論用高效液相色譜法測定鹽酸麻黃堿的含量,不同的文獻(xiàn)報(bào)道,檢測波長、流動(dòng)相有所不同。
圍內(nèi)進(jìn)行掃描,結(jié)果顯示鹽酸麻黃堿在207 nm處有最大吸收,且其它組分在該波長處無干擾,因此,選擇該波長作為檢測波長。曾以乙腈?磷酸二氫鉀緩沖液、甲醇?水、甲醇?0.01 mol/L磷酸氫二鉀為流動(dòng)相,鹽酸麻黃堿有拖尾峰出現(xiàn),分離效果差,而以乙腈?0.1%磷酸溶液為流動(dòng)相,鹽酸麻黃堿在4.5~27.0 mg/L范圍內(nèi),溶液的濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系,檢測靈敏度高,保留時(shí)間適宜。
本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法測定止喘口服液中鹽酸麻黃堿的含量,確定了色譜條件及檢測濃度范圍,本方法簡便、快速、準(zhǔn)確,解決了紫外分光光度法測定時(shí)樣品處理繁瑣費(fèi)時(shí)造成的誤差。采用紫外分光光度法測定,在樣品處理時(shí)需精密加入茚三酮溶液(臨用新配),用1%碳酸鈉溶液調(diào)pH至7.8~7.9,然后置水浴中加熱10 min,迅即放冷,精密加水7 mL再測定。而采用HPLC法樣品只需過濾稀釋后直接進(jìn)樣,節(jié)省了時(shí)間,也節(jié)約了試劑,適用于鹽酸麻黃堿的含量測定。