目的：學(xué)會(huì)檢測(cè)微生物與氧關(guān)系的方法,了解微生物與氧的關(guān)系.

    內(nèi)容：通過(guò)調(diào)整轉(zhuǎn)速和瓶裝量檢測(cè)微生物生長(zhǎng)與氧氣的關(guān)系.

 

二、實(shí)驗(yàn)材料和用具：

    大腸桿菌斜面菌種、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基.

    吸量管、三角瓶、恒溫振蕩器、721分光光度計(jì)、比色杯等.

 

三、操作步驟：

(一)LB培養(yǎng)基的制備：

1．配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基.

2．分裝：取4個(gè)300mL三角瓶,每瓶裝入50mL培養(yǎng)基,編號(hào)為1、2、3、4；另取4個(gè)500mL三角瓶,每瓶分別裝入50mL、l00mL、150mL和200mL培養(yǎng)基,編號(hào)為5、6、7、8.再取一個(gè)100mL三角瓶,裝入20mL培養(yǎng)基,剩余的培養(yǎng)基裝入到兩個(gè)500mL三角瓶中,所有三角瓶均用8層紗布和線(xiàn)繩包扎.

3．滅菌：將上述分裝的培養(yǎng)基于121℃濕熱滅菌30min,冷卻后備用.

(二)供試菌種的制備：

l．菌種活化：將冰箱中儲(chǔ)藏的大腸桿菌斜面菌種轉(zhuǎn)接至牛肉膏蛋白胨斜面培養(yǎng)基上,37℃培養(yǎng)18~20h備用.

2．種子制備：取上述活化的大腸桿菌一環(huán)接人盛有20mL牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的100mL三角瓶中,37℃,200r/min搖床培養(yǎng)16～18h作為供試種子.

(三)不同轉(zhuǎn)速對(duì)大腸桿菌生長(zhǎng)的影響：

    取1~4號(hào)三角瓶,每瓶接入lmL上述大腸桿菌種子,1號(hào)靜置于溫箱中,2號(hào)置75r/min搖床,3號(hào)置于150r/min搖床,4號(hào)置于225r /min搖床,在37℃下培養(yǎng)12~16h后取出,搖勻,經(jīng)適當(dāng)稀釋后,測(cè)定每個(gè)瓶中的OD值(λ=600nm),并同時(shí)以原培養(yǎng)基不接種作對(duì)照測(cè)定.

(四)不同瓶裝量對(duì)大腸桿菌生長(zhǎng)的影響：

    取上述5~8號(hào)三角瓶,按1%的接種量接人上述大腸桿菌種子,37℃,200r/min培養(yǎng)12~16h后一并取出,用721分光光度計(jì)測(cè)定OD值(λ=600m),如密度太大可作適當(dāng)稀釋后再測(cè)OD值.

 

四、注意事項(xiàng)：

1．接種前要將種子充分搖勻,接種時(shí)要保證接種量一致.嚴(yán)格無(wú)菌操作,以免污染.

2．測(cè)定OD值時(shí)要搖勻后再取培養(yǎng)液.若經(jīng)稀釋后測(cè)定,則各瓶培養(yǎng)物的稀釋倍數(shù)要一致.