答:保存的是第三代復(fù)活出來后,如果采用平板或肉湯活化相當(dāng)于轉(zhuǎn)接了一代,就是第四代了,如果還在瓷珠里的話就還是原來的代數(shù)。如果是保存在斜面上,這一支斜面一直就是第三代,如果轉(zhuǎn)接到另一支斜面就是第四代了。傳代原則,菌株活化復(fù)蘇不論以任何形式繁殖了一次就算是傳了一代。但如果僅是物理位置的轉(zhuǎn)移沒有繁殖就不是傳代,需要注意。
2.剛買回來的陽性菌株是第0代嗎?
答:一般菌株你買回來的時候上面都會寫明第幾代,常規(guī)來說都是第0代的。像購買的ATCC或CICC的凍干粉都是標(biāo)記為0代的。
3.菌株傳代保存到瓷珠里一定要挑單菌落嗎?
答:不一定非挑單菌落,但是一定要挑相同特征的菌落,就是說從同一個菌落純化出來的,以保證它們的特性完全一致。原則是盡量多挑,寧多勿少。
4.菌株保存是-70℃還是-80℃有具體標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定么?
答:其實(shí)是有標(biāo)準(zhǔn)的,《SN/T 2632-2010 微生物菌株常規(guī)保藏技術(shù)規(guī)程》是關(guān)于菌株保藏的一個標(biāo)準(zhǔn),大家可以學(xué)習(xí)一下,各個保存方式都有介紹,但是瓷珠是比較新興的保存方式暫時里面還沒有收錄。
5.怎樣延長菌株的保存時間呢?
大量的實(shí)驗(yàn)證明菌株在低溫、干燥、缺氧、缺營養(yǎng)的條件下保存效果是最好的,越接近這種保存條件,菌株的保存時間越長。
6.怎樣純化菌株?
純化就是從TSA上或別的非選擇性平板上轉(zhuǎn)接一次,這就相當(dāng)于純化了。
7. 我們保存的一代菌株是不是要重新傳代保存呢,認(rèn)證老師會不會認(rèn)為這是個錯誤?
答:應(yīng)該不會,認(rèn)證老師不會提出這種問題的,不過最好是一代菌株保存一些、二代菌株保存一些,使用時工作菌株最好使用第三代菌株,一代菌株可作為長期保存用。
8. 為何要將第三代作為工作菌株?
答:多傳代幾次后菌株的活力會明顯提高,但最多傳代到第五代后就不能用了,因?yàn)榈谖宕缶觌m然不會完全變異,但變異率會明顯增加,因此選用第三代作為工作菌株是比較合適的,若使用第一、第二代菌株活力沒有那么強(qiáng)。
9.用瓷珠管反復(fù)上下?lián)u勻,有泡沫不容易吸出來,怎么辦?
答:不必特別劇烈大尺度的搖動瓷珠管,稍微上下晃動就可以;如果確實(shí)有泡沫的話可以靜置一會,讓菌株多吸附一下瓷珠也是可以的。
10. 老師,霉菌需要長出孢子保存,可有霉菌孢子的圖片,長到什么程度就可以保存了呢?
保存這種黑色孢子就可以,這是黑曲霉的圖片。
11. 瓷珠管液體混勻可以吹吸么?
答:不建議吹吸,因?yàn)榭諝饫锟赡芤矌в胁糠值募?xì)菌,萬一使用的槍頭等有菌混進(jìn)去就不太好了,直接擰緊保存管蓋子后上下?lián)u晃即可。
12. TSA斜面一般多少度保存,可以放在冷藏里嗎?
答:2-8℃保存,放在冷藏是可以的;注意弧菌和綠膿桿菌要放到室溫20-25℃保存,否則會很快死亡。
13.如果TSA斜面放在冷凍里面,會有什么影響?
答:瓊脂冷凍后性狀會發(fā)生改變,會變得很軟,結(jié)構(gòu)發(fā)生改變,所以不建議冷凍;如果要冷凍的話就采用甘油保存法或瓷珠保存法。
14.用瓷珠管保存產(chǎn)氣莢膜梭菌老是保存不好!做好瓷珠管之后瓷珠管要放到厭氧袋里面再放到-20℃么?
答:如果冷凍保存最好放在厭氧袋里再-20°保存,保存效果還可以;或者可以采用庖肉培養(yǎng)基保存,它是一種液體培養(yǎng)基,將產(chǎn)氣莢膜梭菌接進(jìn)去然后2-8 ℃保存,可以保存一年沒有問題,在厭氧環(huán)境下保存效果最好。