1.食品檢驗(yàn)為什么要測(cè)定細(xì)菌菌落總數(shù)?

答:測(cè)定細(xì)菌菌落總數(shù)是檢驗(yàn)食品純度程度的指標(biāo)，也是判斷其保存能力的指標(biāo)。

答: 不能代表該食品上所有細(xì)菌菌數(shù)。因?yàn)樵趯?shí)驗(yàn)過(guò)程中會(huì)造成細(xì)菌的損失或死亡，食品上的細(xì)菌包括了各種各樣的微生物。

答：因?yàn)闋I(yíng)養(yǎng)瓊脂溫度，若溫度高于(46士1)℃ 容易將驗(yàn)樣中的菌燙死；若溫度低于(46士1) ℃則營(yíng)養(yǎng)瓊脂會(huì)凝固，影響培養(yǎng)效果。

答: 因?yàn)槿樘悄扄}發(fā)酵管中的成分有溴甲酚紫，中性時(shí)呈藍(lán)紫色，酸性時(shí)呈黃色。如果顏色不變(量藍(lán)紫色)，說(shuō)明無(wú)產(chǎn)酸的大腸菌群；如果顏色變黃色，說(shuō)明可能出現(xiàn)能分解乳糖產(chǎn)酸的大腸菌群；膽鹽可以抑制其它細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖；看杜氏小管中是否有氣體，判斷是否為分解乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣的大腸自群。

答:目的是檢驗(yàn)培養(yǎng)基是否受到污染，驗(yàn)證無(wú)菌操作。

答:初發(fā)酵是樣品的發(fā)酵結(jié)果，不是大腸菌群純菌的發(fā)酵試驗(yàn)，有可能受其它雜菌影響判斷結(jié)果。進(jìn)行證實(shí)實(shí)驗(yàn)避免假陽(yáng)性結(jié)果。

答: 膽鹽能抑制革蘭氏陽(yáng)性菌等雜菌生長(zhǎng)，在初發(fā)酵培養(yǎng)基已經(jīng)加入膽鹽抑制革蘭氏陽(yáng)性菌生長(zhǎng)，并在EMB培養(yǎng)基上進(jìn)行分離培養(yǎng)，因此復(fù)發(fā)酵培養(yǎng)時(shí)無(wú)需乳糖發(fā)酵管，以免大腸菌群受到抑制。

答:應(yīng)要擦掉油加香柏油，作用是增加折光率,也就是增加了顯微鏡的分辨率。油的折光率和分辨率成反比(有公式),同時(shí)與波長(zhǎng)成正比。

答:使用高倍鏡和油鏡時(shí)鏡頭距高標(biāo)本較近，而粗調(diào)節(jié)器的調(diào)節(jié)幅度較大，粗調(diào)節(jié)器的誤操作會(huì)使鏡頭大幅度向標(biāo)本移動(dòng)，很容易損壞標(biāo)本和鏡頭。一般先用低倍鏡找到物象后換到高倍鏡，就只需要用細(xì)調(diào)節(jié)器了。

答:在一般情況下，當(dāng)物像在一種物鏡中已清晰聚焦后轉(zhuǎn)動(dòng)物鏡轉(zhuǎn)換器將其他物鏡轉(zhuǎn)到工作位置進(jìn)行觀察時(shí)，物像將保持基本準(zhǔn)焦的狀態(tài)。這種現(xiàn)象稱為物鏡的同焦。利用這種同焦現(xiàn)象，可以保證在使用高倍鏡或油鏡等放大倍數(shù)高、工作距離短的物鏡時(shí)僅用細(xì)調(diào)節(jié)器即可對(duì)物像清晰聚焦，從而避免由于使用粗調(diào)節(jié)器時(shí)可能的誤操作而損壞鏡頭或載玻片。

答:物鏡的NA值（物鏡的數(shù)值孔徑)與照明光源的波長(zhǎng)。

答:細(xì)菌用油鏡，真菌用高倍鏡。都是先用低倍鏡找到目標(biāo)后，再用高倍鏡太調(diào)到合適的視野和合適的清晰度。

如：放線菌、酵母菌、多細(xì)胞真菌相對(duì)較大，用放大40倍的物鏡就可以看了；細(xì)菌小，要用放大1000倍的物鏡看，感覺還很小；病毒那就要用電子顯微鏡看了。

答:涂片環(huán)節(jié)、加熱固定環(huán)節(jié)、脫色環(huán)節(jié)，其中最關(guān)鍵的環(huán)節(jié)是脫色環(huán)節(jié)。

答:著色不均，染色效果不好；陰性陽(yáng)性不明顯，分不太清楚，問(wèn)題是不便于顯微鏡下觀察是陽(yáng)性茵還是陰性菌。

答:不可以。因?yàn)榈馀c染料會(huì)結(jié)合成大分子，使得染料分子不能穿過(guò)細(xì)胞的細(xì)胞壁，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成影響。脫色后、復(fù)染前，革蘭氏陽(yáng)性菌呈紫色，陰性菌無(wú)色。

答:不行。在復(fù)染之前，革蘭氏陰性菌是無(wú)色透明的。在顯微鏡下很難觀察到或者脫色過(guò)度，也會(huì)造成陽(yáng)性菌脫色。不經(jīng)過(guò)復(fù)染，無(wú)法進(jìn)一步區(qū)別。

答：1.若未完全干燥載玻片上的液體會(huì)污染油鏡鏡頭，鏡頭非常精密被污染后不利于下次觀察。 2.若未完全干燥，水滴會(huì)影響油與玻璃之間折光率，造成視野不夠清晰。

18.如果涂片未以熱固定將會(huì)出現(xiàn)什么問(wèn)題?加熱溫度過(guò)高、時(shí)間太長(zhǎng)，又會(huì)怎么樣呢?

答：如果沒有加熱固定的話，水分蒸發(fā)太慢或者在染色時(shí)菌體會(huì)被沖洗掉；如果加熱時(shí)間過(guò)久，菌體變形或形態(tài)破壞，無(wú)法染色。

19.制各培養(yǎng)基的一般程序是什么?

答:稱量一一溶解——調(diào)pH值——融化瓊脂——過(guò)濾分裝——包扎標(biāo)記——滅菌一一倒干板。

20.做過(guò)實(shí)驗(yàn)后，你認(rèn)為在制各培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)注意些什么問(wèn)題?

答:溶解配料的水要適量；pH要調(diào)節(jié)合適；要小心手提式高壓鍋的使用；倒平板時(shí)要防止培養(yǎng)基被污染。

21.滅菌在微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)操作中有何重要意義?

答:防止培養(yǎng)基被污染；防止雜菌影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

22.試述高壓蒸汽滅菌的操作方法和原理？

答:高壓滅菌的原理是:在密閉的蒸鍋內(nèi)，其中的蒸汽不能外溢，壓力不斷上升，使水的沸點(diǎn)不斷提高，從而鍋內(nèi)溫度也隨之增加。在0.1MPa的壓力下，鍋內(nèi)溫度達(dá)121℃，在此蒸汽溫度下，可以很快殺死各種細(xì)菌及其高度耐熱的芽孢。

操作方法: 加水——裝料、加蓋一一排氣一一升壓、保壓和降壓一一取料

23.高壓蒸汽滅菌時(shí)應(yīng)注意哪些事項(xiàng)?

答:第一：無(wú)菌包不易過(guò)大，不易過(guò)緊，各包裹間要有間隙，使蒸汽能對(duì)流易滲透到包裹中央。第二：布類物品應(yīng)放在金屬類物品上，否則蒸汽遇冷凝聚成水珠，使包布受潮，阻礙蒸汽進(jìn)入包裹中央，嚴(yán)重影響滅菌效果。第三：定期檢查滅菌效果。

24.如何確定平板上某單個(gè)菌落是否為純培養(yǎng)?

答:通過(guò)觀察菌落特征；單個(gè)菌落再次劃線分離。

25.試述如何在接種中，貫徹?zé)o菌操作的原則?

答:保持操作臺(tái)的無(wú)菌狀態(tài)與在無(wú)菌室操作；操作前，要進(jìn)行手的消毒；接種環(huán)要加熱滅菌；接種物品要標(biāo)記。

26.為何要用乳酸-石炭酸溶液作霉菌水浸片?

答:用乳酸-石炭酸的優(yōu)點(diǎn)是可使細(xì)胞不變形，具有殺菌、防腐作用；不易干燥，能保持軟長(zhǎng)時(shí)間；能防止孢于四處飛散。

27.比較霉菌菌絲與假絲酵母菌絲的區(qū)別

答:假絲酵母是指能形成假菌絲、不產(chǎn)生子囊孢子的酵母。假菌絲沒有橫隔，各細(xì)胞間僅以狹小的面積相連，呈藕節(jié)狀，在分隔處溢縮。霉菌的菌絲大多有橫隔， 整個(gè)菌絲的直徑粗細(xì)胞直徑一致，且分枝與主于的直徑一致；菌絲頂端常呈鈍圓形，相連細(xì)胞間的橫隔面積與細(xì)胞直徑一致，是竹節(jié)狀的細(xì)胞串。假菌絲與真茵絲明顯不同處在于其兩細(xì)胞間有一細(xì)腰，而不象直正菌絲橫隔處兩細(xì)胞寬度一致。

28.細(xì)菌與酵母菌的菌落有何區(qū)別？

答:細(xì)菌菌落光滑，易于基質(zhì)脫離；酵母菌菌落較細(xì)菌菌落大而厚且酵母菌的菌落較濕潤(rùn)。

29.為什么隨著顯微鏡放大倍數(shù)的改變。目鏡測(cè)微計(jì)每格相對(duì)的長(zhǎng)度也會(huì)改變?能找出這種變化的規(guī)律嗎?

答:因?yàn)槟跨R測(cè)微尺所測(cè)量的是微生物細(xì)胞經(jīng)地顯微鏡放大之后所成像的大��；規(guī)律是刻度實(shí)際代表的長(zhǎng)度隨使用的目鏡和物鏡放大倍數(shù)及鏡簡(jiǎn)的長(zhǎng)度而改變。

30.根據(jù)測(cè)量結(jié)果。為什么同種酵母菌的菌體大小不完全相同?

答:菌株之間的生長(zhǎng)期不同；受環(huán)境的影響；遺傳的基因表達(dá)不完全一致。

31.能否用血球計(jì)數(shù)板在油鏡下進(jìn)行計(jì)數(shù)?為什么?

答:不能。計(jì)數(shù)時(shí)滴在血球計(jì)數(shù)板上的是懸菌液，相當(dāng)于在鏡頭和計(jì)數(shù)板直接加了一層水。水層會(huì)降低視野的亮度和顯微鏡的分辨率，造成菌體和網(wǎng)格線不清晰.

32.血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)的誤差主要來(lái)自那些方面?如何減少誤差?

答:誤差主要來(lái)自試劑誤差、方法誤差、儀器誤差；減少誤差有保持樣品的純凈、細(xì)胞溶液必須震蕩均勻、樣品濃度要適中、血球計(jì)數(shù)板整潔清晰。

33.菌種保藏中，石蠟油的作用是什么?

答:作用是密封，防止空氣進(jìn)入，降低菌種的生理活性。

答:用甘油冷凍保藏方法保存，在液體培養(yǎng)基中加入15%的甘油，然后低溫冷凍（-7度)左右。