1.主題內(nèi)容與適用范圍

本方法規(guī)定了壓力蒸汽滅菌技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)及其評價滅菌效果的檢測方法。

本方法適用于對壓力蒸汽滅菌效果的評價。

2.試劑

本標(biāo)準(zhǔn)所用試劑,凡未說明規(guī)格者,均為分析純(AR),水為蒸餾水。

2.1 蛋白胨

2.2 葡萄糖

2.3 溴甲酚紫酒精溶液:取溴甲酚紫2.0g,溶于100mL95%乙醇中。

2.4 溴甲酚紫蛋白胨水培養(yǎng)基配制;蛋白胨10.0g,葡萄糖5.0g,溶于1000mL蒸餾水中,調(diào)pH值至7.0~7.2,然后再加2%溴甲酚紫酒精溶液0.6mL,搖勻后,按5mL/管,分裝包口,置壓力蒸汽滅菌器中,于115℃滅菌40min后備用。

3.指示菌

嗜熱脂肪桿菌芽胞(ATCC7953或SSI K31)菌片,含菌量為5×10⁵~5x10⁶/片,121℃下,殺滅90%微生物所需時間D121值為1.3~1.9min、殺滅時間（KT值)為≤19mm，存活時間(ST值)為≥3. 9min。

4.化學(xué)指示劑

需用衛(wèi)生部批準(zhǔn)的化學(xué)指示劑

5.技術(shù)要求

6.檢測方法

6.1 生物學(xué)指標(biāo)(用作壓力蒸汽滅菌設(shè)備滅菌效果的依據(jù))。

6.1.1 將嗜熱脂肪桿芽胞菌片兩個分別放入滅菌小紙袋內(nèi),置于標(biāo)準(zhǔn)試驗包中心部位。

6.1.2 滅菌柜室內(nèi),上、中層中央和排氣口處各放置一個標(biāo)準(zhǔn)試驗包(由3件平紋長袖手術(shù)衣,4塊小手術(shù)巾,2塊中手術(shù)巾,1塊大手術(shù)巾，30塊10cm×10cm、8層紗布敷料包裹成25cmx30cmX30cm大小)。手提壓力蒸汽滅器用通氣貯物盒(2cm×13cm×6cm)代替標(biāo)準(zhǔn)試驗包,盒內(nèi)盛滿中試管,指示菌片放于中心部位兩只滅菌試管內(nèi)(試管口用滅菌牛皮紙包封),將盒平放于手提壓力蒸汽滅菌器底部。

6.1.3 經(jīng)一個滅菌周期后，在無菌條件下，取出標(biāo)準(zhǔn)試驗包或通氣貯物盒中的指示菌片,投入溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基中,56℃培養(yǎng)48h,觀察培養(yǎng)基顏色變化。

6.2 化學(xué)指標(biāo)

在物品包外用化學(xué)指示膠帶,可作為物品是否經(jīng)過滅菌的處理標(biāo)志,在物品包內(nèi)中心部位用化學(xué)指示劑,可作為物品是否滅菌的參考標(biāo)志。

7.結(jié)果判定及評價

7.1 同次檢測中,標(biāo)準(zhǔn)試驗包或通氣貯物盒內(nèi),每個指示菌片接種的溴甲酚紫蛋白胨水培養(yǎng)基全部不變色,判定為滅菌合格。指示菌片之一接種的溴甲酚紫蛋白胨水培養(yǎng)基由紫色變?yōu)辄S色時,判定為滅菌不合格。

7.2 化學(xué)指示劑的顏色變?yōu)榕c滅菌合格標(biāo)準(zhǔn)色相同時,或熔化時作為滅菌合格的參考標(biāo)準(zhǔn)。

8.主題內(nèi)容與適用范圍

本方法規(guī)定了物體表面消毒用紫外線的波長、強(qiáng)度及評價其消毒效果的物理學(xué)指標(biāo)和生物學(xué)檢測方法。

本方法適用于紫外線直接照射到的物體表面消毒效果評價。

9.指示菌

9.1 大腸桿菌(8099或ATCC 25922）。

9.2 枯草桿菌黑色變種芽胞(ATCC 9372）。

10.物理學(xué)指標(biāo)

10.1 在電壓220V時,普通30W直管型紫外線燈,在室溫為20~25℃的使用情況下253.7nm紫外線輻射強(qiáng)度(垂直1m處)應(yīng)≥70uW/cm²。

10.2 在電壓220V時,高強(qiáng)度紫外線燈,在室溫為20~25℃的使用情況下,253.7nm紫外線輻射強(qiáng)度（垂直1m處)應(yīng)≥200uW/cm²。

10.3 照射劑量按式(1)計算：

11.檢測方法

11.1 物理學(xué)檢測方法

11.1.1 燈管的紫外線強(qiáng)度(uW/cm²)用中心波長為253.7nm的紫外強(qiáng)度測定儀(標(biāo)定有效期內(nèi)），在燈管垂直位置1m處測定。

11.1.2 在實際應(yīng)用中消毒表面的照射強(qiáng)度應(yīng)以燈管與消毒對象的實際距離測定。

11.1.3 表面消毒接受的照射劑量,應(yīng)達(dá)殺滅目標(biāo)微生物所需。對大腸桿菌，照射劑量應(yīng)達(dá)到20000uW.s/cm²，對枯草桿菌黑色變種芽胞應(yīng)達(dá)到100000uW.s/cm²。

11.2 生物學(xué)檢測方法

11.2.1 采用載體定量消毒試驗。載體制備按本標(biāo)準(zhǔn)附錄C進(jìn)行。

11.2.2 開啟紫外線燈5min后,將8個染菌玻片平放于滅菌器皿中,水平放于適當(dāng)距離照射,于4個不同間隔時間各取出2個染菌玻片,分別投入2個盛有5mL洗脫液(1%吐溫80，1%蛋白胨生理鹽水)試管中,振打80次。

11.2.3 經(jīng)適當(dāng)稀釋后,取0.5mL洗脫液,作平板傾注,每個染菌玻片接種兩個,放37℃培養(yǎng)48h作活菌計數(shù)。

11.2.4 陽性對照,除不作照射處理外,取2個染菌玻片分別投入2個盛有5mL洗脫液中振打80次,余按4.2.3進(jìn)行。

11.2.5計算殺滅率

12.判定標(biāo)準(zhǔn)

12.1 對指示菌殺滅率≥99%判為消毒合格。

12.2 達(dá)物理學(xué)檢測標(biāo)準(zhǔn)時,作為消毒合格的參考標(biāo)準(zhǔn)。

13.主題內(nèi)容與適用范圖

本方法具體規(guī)定了消毒劑清毒效果生物學(xué)檢測方法及其評價標(biāo)準(zhǔn)。

本方法適用于消毒劑對各種物體的消毒效果評價。

14.理化指標(biāo)

將消毒劑置20土2℃水浴中,測定在使用濃度下殺滅指示微生物達(dá)到消毒或滅菌所需的最短時間(min)。

15.指示微生物

15.1 細(xì)菌

15.1.1 細(xì)菌殖體:金黃色葡萄球菌(ATCC 6538)、大腸桿菌(8099或ATCC25922)。

5.1.2 細(xì)菌芽胞:枯草桿菌黑色變種芽胞(ATCC 9732)。

15.2 真菌:白色念珠菌(ATCC 10231)。

15.3 乙型肝炎表面抗原:純化抗原(1.0mg/mL)。

16. 檢測方法

16.1 中和試驗(見附錄A)

16.2 消毒劑定性消毒試驗(見附錄B)。

16.3 消毒劑定量消毒試驗(見附錄C)。

16.4 消毒劑殺菌能量試驗(見附錄D)

16.5 乙型肝炎表面抗原( HBSAg)抗原性破壞試驗(見附錄E)。

17.消毒效果評價標(biāo)準(zhǔn)

17.1 對細(xì)菌和真菌的殺滅率≥99%,對 HBSAg,將檢測方法靈敏度10⁴倍或5X10⁴倍(載體試驗)的HBSAg抗原性破壞,可判為消毒合格。

17.2 對枯草桿黑色變種芽胞全部殺滅,可判為滅菌合格。

17.3 在實際應(yīng)用中消毒效果評價以有機(jī)物保護(hù)試驗的最低濃度和最短時間為該消毒劑達(dá)到實用消毒所需的濃度和時間。

附錄