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沉降菌檢測標準操作規(guī)程

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2022-06-13
核心提示:1 方法概述:本測試方法采用沉降法,即通過自然沉降原理收集在空氣中的生物粒子于培養(yǎng)基平皿,經(jīng)若干時間,在適宜的條件下讓其繁
 1  方法概述:

本測試方法采用沉降法,即通過自然沉降原理收集在空氣中的生物粒子于培養(yǎng)基平皿,經(jīng)若干時間,在適宜的條件下讓其繁殖到可見的菌落進行計數(shù),以平板培養(yǎng)皿中的菌落數(shù)來判定潔凈環(huán)境內(nèi)的活微生物數(shù),并以此來評定潔凈室(區(qū))的潔凈度。


2  所用的儀器和設(shè)備

2.1  高壓消毒鍋使用時應嚴格按照儀器說明書操作。

2.2  恒溫培養(yǎng)箱必須定期對培養(yǎng)箱的溫度進行校驗。

2.3  培養(yǎng)皿一般采用Ф90mm×15mm 的硼硅酸玻璃培養(yǎng)皿。

2.4  普通肉湯瓊脂培養(yǎng)基的準備及滅菌見附件A


3  測試步驟

3.1  采樣方法

將已制備好的培養(yǎng)皿,按潔凈室沉降菌采樣點布置圖的要求放置,打開培養(yǎng)皿蓋,使培養(yǎng)基面暴露30分鐘(靜態(tài)),再將培養(yǎng)皿蓋蓋上后倒置。

3.2  培養(yǎng)

3.2.1  全部采樣結(jié)束后,將培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

3.2.2  在30℃-35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng),時間不少于48h。

3.2.3  每批培養(yǎng)基應有對照試驗,檢驗培養(yǎng)基本身是否污染?擅颗x定3只培養(yǎng)皿作對照培養(yǎng)。

3.3  菌落計數(shù)

3.3.1  用肉眼直接計數(shù),標記或在菌落計數(shù)器上點計,然后用5-10倍放大鏡檢查,看是否有遺漏。

3.3.2  若培養(yǎng)皿上有2個或2個以上的菌落重疊,可分辨時仍以2個或2個以上菌落計數(shù)。


4  注意事項

4.1  測試用具要作滅菌處理,以確保測試的可靠性,準確性。

4.2  采取一切措施防止人為對樣本的污染。

4.3  對培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件及其他參數(shù)做詳細的記錄。

4.4  由于細菌種類繁多,差別甚大,計數(shù)時一般用透射光于培養(yǎng)皿背面或正面仔細觀察,不要漏計培養(yǎng)皿邊緣生長的菌落,并須注意細菌菌落與培養(yǎng)基沉淀物的區(qū)別,必要時用顯微鏡鑒別。

4.5  采樣前仔細檢查每個培養(yǎng)皿的質(zhì)量,如發(fā)現(xiàn)變質(zhì),破損或污染的應剔除。


5  測試規(guī)則

5.1  沉降菌檢測前,被檢測潔凈室(區(qū))的溫濕度須達到規(guī)定的要求,靜壓差、換氣次數(shù)、空氣流速控制在規(guī)定值內(nèi)。

5.1.2  沉降菌檢測前,被檢測潔凈室(區(qū))已經(jīng)過消毒。

5.1.3  測試狀態(tài)有靜態(tài)和動態(tài)兩種,測試狀態(tài)的選擇必須符合生產(chǎn)的要求,并在報告中注明測試狀態(tài)。

5.2  測試人員

5.2.1  測試人員必須穿戴符合環(huán)境潔凈度級別的工作服。

5.2.2  靜態(tài)測試時,室內(nèi)測試人員不得多于二人。

5.3  測試時間

5.3.1  對單向流,測試應在凈化空調(diào)系統(tǒng)運行不少于15min 后開始。

5.3.2  對非單向流,測試應在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運行不少于30min后開始。

5.4  沉降菌計數(shù)

5.4.1  采樣點數(shù)目及其布置

 

最少采樣點數(shù)目如下表

面  積

m2

潔 凈 度 級 別

A

B

C

D

<10

≥10-<20

≥20-<50

≥50-<100

≥100-<200

2-3

5

8

16

50

2-3

5

8

16

50

2

2

2

5

10

2

2

2

2

3

注:表中的面積,對于單向流潔凈室,是指送風面面積。對于非單向流潔凈室是指房間的面積。

在滿足最少測點數(shù)的同時,還宜滿足最少培養(yǎng)皿數(shù)見下表

潔凈度級別

所需Ф90mm培養(yǎng)皿數(shù)(以沉降30分鐘計)

A、B

C

D

14

2

2

采樣點的布置

工作區(qū)采樣點的位置離地0.8m-1.5m左右(略高于工作面)。     

可在關(guān)鍵設(shè)備或關(guān)鍵工作活動范圍處增加采樣點。采樣點位置的詳細規(guī)則見附件B。

房間采樣點超過10個點,每7天對所有采樣點輪流監(jiān)測一次。

5.5  記錄

監(jiān)測記錄中應記錄房間溫度、相對濕度、測試狀態(tài)。

5.6  結(jié)果計算

5.6.1  用計數(shù)方法得出各個培養(yǎng)皿的菌落數(shù)。

5.6.2  平均菌落數(shù)的計算,見式(1)。

 

圖片                       

式(1)

                              

式中:m  平均菌落數(shù);

    m1 1號培養(yǎng)皿菌落數(shù);

    m2 2號培養(yǎng)皿菌落數(shù);

    mn n號培養(yǎng)皿菌落數(shù);

    N  培養(yǎng)皿總數(shù)。

5.7  結(jié)果評定標準:

靜態(tài):

潔凈度級別

微生物(沉降菌)最大允許數(shù)

潔凈度級別

微生物(沉降菌)最大允許數(shù)

個/皿

個/皿

A、B級

0

D級

5

C級

3

   

注:表中各數(shù)值均為平均值。

5.7.1  潔凈室(區(qū))內(nèi)的平均菌落數(shù)必須低于所選定的評定標準。

5.7.2  若某潔凈室(區(qū))內(nèi)的平均菌落數(shù)超過評定標準,則必須對此區(qū)域先進行消毒,然后重新采樣兩次,測試結(jié)果均須合格。


6  附件

6.1  附件A:培養(yǎng)基的準備及滅菌

6.1.1  培養(yǎng)基的準備

培養(yǎng)基應購買國家認可的培養(yǎng)基。

6.1.2  培養(yǎng)基平皿的制備

6.1.2.1  將Ф90mm 的培養(yǎng)皿置于121℃濕熱滅菌20min或160℃干熱滅菌2h。

6.1.2.2  將培養(yǎng)基加熱熔化,冷至55℃時,在無菌操作要求下將培養(yǎng)基注入培養(yǎng)皿,每皿約15mL。

6.1.2.3  待瓊脂凝固后,將培養(yǎng)基平皿倒置于30℃-35℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h,若培養(yǎng)基平皿上確無菌落生長,即可供采樣用。

6.1.2.4  注:制備好的培養(yǎng)基平皿宜在2℃-8℃的環(huán)境中存放。

6.2  附件B:采樣點布置

潔凈區(qū)采樣點的布置力求均勻,避免采樣點在某局部區(qū)域過于集中,某局部區(qū)域過于稀疏。

 

編輯:songjiajie2010

 
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