一. 定性分析

    選擇合適的溶劑（非極性），使用有足夠純度單色光的分光光度計，在相同的條件下測定相近濃度的待測試樣和標準品的溶液的吸收光譜，然后比較二者吸收光譜特征：吸收峰數(shù)目及位置、吸收谷及肩峰所在的位置（ l ）等；分子結(jié)構(gòu)相同的化合物應(yīng)有完全相同的吸收光譜。

二. 定量分析

（一）單組分定量分析方法

1. 標準曲線法：配制一系列（5~10）個不同c的標準溶液 ，在適當l —— 通常為 l_max下，以適當?shù)目瞻兹芤鹤鲄⒈�，分別測定A，然后作 A-c 曲線同條件下測定試樣溶液吸光度 A_x ，查找對應(yīng)的 c_x 。

2. 直接比較法：已知試樣溶液基本組成，配制相同基體、相近濃度的標準溶液，分別測定吸光度A_標、A_樣

   根據(jù) L-A 定律： A_標 = K · b · c_標            A_樣 = K · b · c_樣

   則                                              (18)

（二）多組分定量分析

    混合組分的吸收光譜相互重疊的情況不同，測定方法也不相同，常見混合組分吸收光譜相干擾情況有以下三種：

圖5  混合組分吸收光譜的三種相干情況示意圖

1.第一種情況：各種吸光物質(zhì)吸收曲線不相互重疊或很少重疊，則可分別在l₁ 及 l₂ 處測定 a  及 b 組分的 c；

2. 第二種情況  部分重疊：先在 l₁ 處測得 c_a  ,再在 l₂ 處測得混合組分的吸光度 A_a+b ，根據(jù)吸收定律加和性：

即可求得c_b。[應(yīng)先求得 e_{a(l2 )} ，與 e_{a(l2 )} ，并使用相同 b ]

3. 第三種情況:兩吸收曲線互相重疊，但服從 L-B 定律

(1) 解方程組法：

若試樣中需要測定兩種組分，則選定兩個波長l₁ 及 l₂ ，測得試液的吸光度為 A₁和 A₂，則可解方程組求得組分a、b 的濃度c_a、c_b ：

    如果混合物含有 n 個組分，可不經(jīng)分離，在 n 個適當波長處進行 n 次測量，獲得 n個吸光度值，然后解 n 個聯(lián)立方程以求得各組分的濃度。

（2）等吸光度雙波長（消去）法

吸收光譜重疊的 d、e 兩組分共存，現(xiàn)設(shè)法把一種組分(a)的吸光度消去。方法如下：

圖6  二組分混合物吸收光譜用作圖法選擇l₁、l₂（雙波長分光光度法）

   選取兩個適當?shù)牟ㄩLl₁ 和 l₂ ，

使 e₁^d= e₂^d ，而盡可能大，則用這兩個波長l₁ 和 l₂測得混合物溶液吸光度之差 ∆A 應(yīng)只與 c_e 成正比（而與c_d無關(guān)），直接測得c_e ：

   因為             所以    

   若用 1cm 吸收池

    若需測定另一組分 d 時，也可用同樣方法，選擇另一個l₁’ 和 l₂’ ，先消去的 e 的干擾，直接求c_d