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染色體步移(chromosome walking)

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-07-08
在克隆基因組基因時(shí),已知該基因在染色體上的位置但沒(méi)有該基因的序列信息,無(wú)法制備相應(yīng)的探針,因此無(wú)法直接篩查文庫(kù)去克隆基因。此時(shí),如果知道離開(kāi)該基因一定距離上的DNA序列,則可用這個(gè)DNA序列作探針,通過(guò)染色體步移來(lái)逐步接近并最后達(dá)到待克隆的基因。其基本原理是用探針篩查文庫(kù),得到陽(yáng)性克隆后,將這個(gè)重組載體中的插入片段分離出來(lái),然后用這個(gè)片段的末端部分(注意不能包含重復(fù)序列)作為新一輪篩查文庫(kù)的探針;得到新的重組載體中的插入片段,同上一個(gè)插入片段的末端部分(即探針序列)是重疊的,共有的。也就是這兩個(gè)片段是在同一條染色體上相互鄰接的。’于是,再用新得的插入片段的末端部分作為探針,再去篩查文庫(kù)。通過(guò)一系列的操作,得到的插入片段逐漸連接延伸,最后可以步移到待克隆的基因。當(dāng)然,在具體操作過(guò)程中還必須設(shè)計(jì)具體的方法,如同時(shí)構(gòu)建跳步文庫(kù)(jumping library)和連接文庫(kù)(1inking library)等,使插入片段朝著一個(gè)方向步移。
 
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