1．基本原理所謂平衡飽和，是指抗原和抗體反應(yīng)達(dá)到再不結(jié)合，也不解離的平衡狀態(tài)，稱為飽和狀態(tài)，即平衡飽和。所以，有人稱此為飽和分析法。這意味著抗原或被測抗原、標(biāo)記抗原、抗體三者一起溫育。
2．加樣程序一般先加標(biāo)準(zhǔn)物或被測樣品，再加抗血清，最后加標(biāo)記物。這樣的順序是讓標(biāo)準(zhǔn)物或被測物與抗體有短暫的結(jié)合，提高抗原的競爭抑制能力。
在小分子半抗原的放射免疫分析中，標(biāo)記抗原和未標(biāo)記抗原與抗體結(jié)合的親合力常常是不相同的，前者比后者的親合力高。因此，上述加樣程序就更有必要，所以一般都采用先加標(biāo)準(zhǔn)物或樣品和抗血清，后加標(biāo)記物。這樣測定也比較穩(wěn)定。
在大分子蛋白質(zhì)抗原的放射免疫分析中，如果是雙抗體分離法，抗原和標(biāo)記抗原與抗體三者加樣，可不分先后，有的是標(biāo)準(zhǔn)物、標(biāo)記物、抗血清的加樣順序，但一般習(xí)慣還是標(biāo)準(zhǔn)物或血樣、抗血清、標(biāo)記物、然后混勻溫育24～48h，再加雙抗體，繼續(xù)溫育24h，使免疫反應(yīng)達(dá)到平衡。對一些多肽激素的放射免疫分析，應(yīng)用雙抗體分離法，其流程比較長，這樣的順序同樣可不分先后。
以大鼠垂體、下丘腦β-內(nèi)啡肽RIA測定程序為例：
�。�1）加樣（單位μl；總反應(yīng)體積500μl）
�。�2）孵育：4℃，24h
（3）分離B與F：每管加入2%加膜活性炭溶液300μl，搖勻，立即離心，去上清，測沉淀（F）的CPM數(shù)。