試管凝集反應(yīng)

材料與試劑
以布氏桿菌病試管凝集反應(yīng)為例。
1.試管（1cm×8cm）、試管架、恒溫箱、吸管等。
2.布氏桿菌病標(biāo)準(zhǔn)陽性血清、標(biāo)準(zhǔn)陰性血清、布氏桿菌試管凝集用抗原。
3.布氏桿菌病待檢血清。
4.0.5%石炭酸生理鹽水。
操作方法
1.試管4支，另取對照管3支，共7支試管，置于試管架上。如檢多份血清，則對照只需做一份。
2.按表4-1加入0.5%石炭酸生理鹽水，另用1ml的刻度吸管吸取0.2ml待檢血清加入第一試管中。反復(fù)吹吸5次混勻。
3.以第1試管中吸取1.50ml棄之，再吸取0.50ml加入第2試管中，第1試管尚剩0.50ml。按第1管的辦法吹吸混勻第2管，再從第2管吸取0.50ml放入第3管，以此類推，將第4管混勻后，棄去0.50ml。第5管只加0.5%石炭酸生理鹽水0.50ml，第6管加1︰25稀釋的布氏桿菌病標(biāo)準(zhǔn)陽性血清，第7管加1︰25稀釋的布氏桿菌病標(biāo)準(zhǔn)陰性血清0.50ml。
4.將購買的布氏桿菌凝集抗原以0.5%石炭酸生理鹽水做1︰20稀釋，使每ml含菌為8億，每管加0.50ml。
5.全部加畢后，一起振搖，混勻，放入37℃度溫箱12h～14h，取出后至室溫2h～4h，觀察并記錄結(jié)果。
結(jié)果判定
結(jié)果用“ ”表示反應(yīng)強度。
：液體完全透明，菌體完全被凝集呈傘狀沉于管底。
：液體透明，菌體基本被凝集沉于管底。
：液體不甚透明，管底有明顯的凝集沉淀。
：液體透明度不明顯或不透明，有不明顯的沉淀或有沉淀的痕跡。
— ：液體不透明，呈均勻混濁，管底無凝集。有時有少量菌體集中于管底中心，呈臍狀，但振搖時，立即散開呈均勻渾濁。
以出現(xiàn)“ ”的最高血清稀釋倍數(shù)即為該份血清的效價，又叫凝集價。大動物（馬，牛，駱駝等）以凝集價1︰100以上判為陽性，1︰50的凝集價判為可疑。中小動物（豬，羊，狗等）以凝集價1︰50以上判為陽性，1︰25的凝集價判為可疑。
如對照管不符合要求時，試管須廢棄重做。
注意事項
1.結(jié)果為可疑時，隔2～3周后采血重做。陽性畜群，重檢時仍為可疑，可判陽性。對同群中既無臨床癥狀又無凝集反應(yīng)陽性者，馬、豬重檢仍為可疑者，判陰性，牛、羊血清重檢仍為可疑者，可判為陽性，或以補反等核對。
2.對陰性畜群，初檢為可疑，復(fù)檢仍為可疑（即效價不升高者），為慎重起見，可進行補反或細菌分離，如補反和細菌分離均為陰性者，可判為陰性。
3.化驗結(jié)果通知畜主時，必須注明凝集價。
4.凝集反應(yīng)用的血清必須新鮮，過度溶血的血清也不好。用0.5%石炭酸防腐的血清，也最好在15日內(nèi)檢測完。
5.在試管凝集反應(yīng)中，抗原抗體的比例是非常重要的，必須進行摸索，特別是在新建立一項試管凝集反應(yīng)時，如抗體比例過大，即稀釋倍數(shù)較小，可出現(xiàn)假陰性現(xiàn)象，即在“ ”的前幾管可出現(xiàn)“—”或低于“ ”的反應(yīng)強度，這種現(xiàn)象就叫前帶現(xiàn)象。如進行馬流產(chǎn)傷寒沙門氏血清試管凝集反應(yīng)時，就可能出現(xiàn)這種前帶現(xiàn)象。