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沉淀反應(yīng)技術(shù)(Precipitation reaction technique)

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-06-27

可溶性抗原(如細(xì)菌浸出液、含菌病料浸出液、血清以及其他來源的蛋白質(zhì)、多糖質(zhì)、類脂體等)與其相應(yīng)的抗體相遇后,在電解質(zhì)參與下,抗原抗體結(jié)合形成白色絮狀沉淀,出現(xiàn)白色沉淀線,此種現(xiàn)象稱為沉淀反應(yīng)。沉淀反應(yīng)中的抗原叫沉淀原(precipitinogen),與沉淀原發(fā)生反應(yīng)的抗體稱為沉淀素(precipitin)。沉淀反應(yīng)的發(fā)生機制與凝集反應(yīng)基本相同。不同之點是:沉淀原分子小,單位體積內(nèi)總面積大,故在定量試驗時,通常稀釋抗原。

沉淀反應(yīng)主要包括有環(huán)狀沉淀反應(yīng)、絮狀沉淀反應(yīng)和瓊脂擴散反應(yīng)。

環(huán)狀沉淀反應(yīng)是最早的沉淀反應(yīng),目前在鏈球菌的分類、鑒定,昆蟲吸血性能及所吸血液來自何種動物的鑒別,肉品種屬鑒定及炭疽尸體與皮張的檢驗工作中仍然應(yīng)用。主要是用已知的抗體診斷未知的抗原。

絮狀沉淀反應(yīng)是將抗原與血清在試管內(nèi)混合,在電解質(zhì)存在的情況下,抗原抗體復(fù)合物可形成混濁沉淀或絮狀沉淀凝聚物,此法通常用于毒素與抗毒素的滴定。

瓊脂凝膠免疫擴散(Agar-gel immunodiffusion)是沉淀反應(yīng)的一種形式,是指抗原抗體在瓊脂凝膠內(nèi)擴散,特異性的抗原抗體相遇后,在凝膠內(nèi)的電解質(zhì)參與下發(fā)生沉淀,形成可見的沉淀線。這種反應(yīng)簡稱瓊脂擴散。

抗原抗體擴散使用的凝膠種類很多,除瓊脂外還有明膠、果膠、聚丙烯酰胺等,因此總的名稱叫免疫擴散(Immunodiffusion 簡寫為ID)。瓊脂擴散是免疫擴散中的一種方法。

瓊脂擴散的原理是:物質(zhì)自由運動形成擴散現(xiàn)象,擴散可以在各種介質(zhì)中進(jìn)行。我們所使用的1%~2%的瓊脂凝膠,瓊脂形成網(wǎng)狀構(gòu)架,空隙中是98%~99%的水,擴散就在此水中進(jìn)行。1%~2%瓊脂所形成的構(gòu)架網(wǎng)孔較大,允許分子量在20萬以下甚至更大些的大分子物質(zhì)通過,絕大多數(shù)可溶性抗原和抗體的分子量在20萬以下,因此可以在瓊脂凝膠中自由擴散,所受阻力甚小。二者在瓊脂凝膠中相遇,在最適比例處發(fā)生沉淀,此沉淀物因顆粒較大而不擴散,故形成沉淀帶。

 
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