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單克隆抗體技術(shù)-骨髓瘤細胞

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-06-27

骨髓瘤細胞能產(chǎn)生并分泌大量的免疫球蛋白,這樣的瘤細胞融合后,可能影響或降低所分泌抗體的滴度,所以必須選育出非分泌免疫球蛋白缺陷型的骨髓瘤細胞。

選擇骨髓瘤細胞的條件:①該瘤細胞系的來源應與制備脾細胞小鼠為同一品系,以便兩者的組織相容性抗原一致;②骨髓瘤細胞必須是靜息狀態(tài),不產(chǎn)生γ球蛋白或不分泌到細胞外;③骨髓瘤細胞生長需要一個較高的細胞密度,最好106個細胞/ml;④生長速度快,繁殖時間短。

目前常用的Balb/c小鼠產(chǎn)生的骨髓瘤細胞株有:①S194/5XXO·BU·1;②SP20Ag14(簡稱SP2);③P2X? ­Ag8·6·5·3(簡稱653);④FO653最為常用,它是由礦物油4-甲基-15烷(Pristane,降植烷)誘發(fā)出來的一種漿細胞瘤(Minerol Oil plasmacy toma,MOPC)并經(jīng)過培育形成一株8-氮鳥嘌呤有抵抗力的亞系。

骨髓瘤細胞一般由有關(guān)單位直接引入,保存于-195℃液氮罐中,試驗時復蘇、增殖、傳代即可。

由于骨髓瘤細胞是半貼壁狀態(tài),很容易脫落,因此不需要胰酶處理。為了防止出現(xiàn)返祖現(xiàn)象,在融合前,可將培養(yǎng)基內(nèi)加入15μg/ml 8-氮鳥嘌呤。取約1×1076×107對數(shù)生長期(即培養(yǎng)15h20h)的骨髓瘤細胞,在室溫離心(400g10min,沉淀以2.5FCS1640液再懸浮并計數(shù)。

 

 
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