(一)材料與試劑配制
1.禽膽汁
2.飽和硫酸銨溶液
3.0.01Mol/L pH7.4PBS液
4.0.10Mol/L pH6.4PBS液(0.30Mol/L NaCl)
5. DEAE52-纖維素
(二)操作方法
1.取冷藏的膽汁3Ⅹml,緩慢滴加Ⅹml飽和硫酸銨液,邊加邊攪拌,使成25%飽和硫酸銨液。4℃放置30min。
1. 3 000r/min離心30min,去沉淀。
2. 取上清,加飽和硫酸銨液,使成35%的飽和度,4℃放置30min。
3. 3 000r/min離心30min,棄上清。
4. 取沉淀,加0.85%NaCl液溶解,加飽和硫酸銨溶液,重復(fù)步驟3和4三次。
5. 將沉淀用0.85%NaCl液溶解,裝入透析袋,以0.01Mol/L pH7.4PBS液透析。
6. 以0.01Mol/L pH7.4PBS液平衡,過DEAE52纖維柱(20×250mm)。
7. 取透析樣品4ml(﹥20mg/ml蛋白濃度)加入層析柱。以0.01Mol/L pH7.4PBS液洗脫。
8. 再用0.10Mol/L pH6.4PBS液(NaCl濃度為0.30Mol/L)洗脫,收集洗脫液。
10.濃縮洗脫蛋白液至20mg/ml,分裝,低溫冰箱保存。