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沉淀反應(yīng)(precipitation)

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-09-16
    一種血清學(xué)反應(yīng)?扇苄钥乖c相應(yīng)抗體結(jié)合,在有適量電介質(zhì)存在下,經(jīng)過一定時間,形成肉眼可見的沉淀物。沉淀反應(yīng)的抗原可以是多糖、蛋白質(zhì)、類脂等。同相應(yīng)抗體比較,抗原的分子小,單位體積內(nèi)含有的抗原量多,做定量試驗時,為了不使抗原過剩,應(yīng)稀釋抗原,并以抗原的稀釋度作為沉淀反應(yīng)的效價。習(xí)慣上將參與沉淀反應(yīng)的抗原稱為沉淀原,抗體稱沉淀素。沉淀反應(yīng)的實驗方法大體可分為環(huán)狀法、絮狀法、瓊脂擴散法三種基本類型。

  環(huán)狀沉淀反應(yīng) 又稱環(huán)狀試驗。主要用于抗原的定性試驗。用已知抗體來檢測未知抗原。在小口徑試管中先加入已知抗血清,然后將待檢抗原小心地加在血清的表面,成為界面清晰的兩層。數(shù)分鐘后,兩界面交界處出現(xiàn)白色沉淀環(huán),為陽性反應(yīng)。本試驗常用做抗原定性,如炭疽的診斷(Ascoli氏試驗)、鑒別血跡、媒介昆蟲的嗜血性等。

  絮狀沉淀反應(yīng) 將抗原與相應(yīng)抗體在試管內(nèi)或凹玻片上混勻,如出現(xiàn)肉眼可見的絮狀沉淀物,為陽性反應(yīng)。如診斷梅毒的康氏反應(yīng)(Kahntest)。

  瓊脂擴散試驗 利用可溶性抗原與抗體在半固體瓊脂內(nèi)進(jìn)行擴散,若抗原與抗體對應(yīng),并且比例適當(dāng),就會出現(xiàn)白色沉淀線,此為陽性反應(yīng)。瓊脂擴散試驗可在試管內(nèi)、平皿中以及玻片上的瓊脂中進(jìn)行。又可分為單向瓊脂擴散試驗和雙向瓊脂擴散試驗兩類。

  單向瓊脂擴散試驗 是一種常用的定量檢測抗原的方法。將適量抗體與瓊脂混勻,澆注成板,凝固后,在板上打孔,孔中加入抗原,抗原就會向孔的四周擴散,邊擴散邊與瓊脂中的抗體結(jié)合。一定時間后,在兩者比例適當(dāng)處形成白色沉淀環(huán)。沉淀環(huán)的直徑與抗原的濃度成正比。如事先用不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)抗原制成標(biāo)準(zhǔn)曲線,則從曲線中可求出標(biāo)本中抗原的含量。本試驗主要用于檢測標(biāo)本中各種免疫球蛋白和血清中各種補體成分的含量,敏感性很高。

  雙向瓊脂擴散試驗 是將半固體瓊脂傾注于平皿內(nèi)或玻片上,待其凝固后,在瓊脂板上打孔,將抗原、抗體分別注入小孔內(nèi),使兩者相互擴散。如果抗原、抗體相互對應(yīng),濃度、比例適當(dāng),則一定時間后,在抗原、抗體孔之間出現(xiàn)清晰可見的沉淀線。雙向瓊脂擴散法可用來分析溶液中的多種抗原。一對抗原、抗體系統(tǒng)只能形成一條沉淀線,不同的抗原抗體系統(tǒng)在瓊脂中擴散的速度不同,可在瓊脂中形成不同的沉淀線。本法主要是用于檢測血清中各種免疫球蛋白、甲胎蛋白、乙肝表面抗原等。缺點是需要時間過長,靈敏度不高。

 
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