一、實驗目的
1.了解高效液相色譜儀的基本結構和工作原理
2.學習高效液相色譜儀的使用
3.學習、掌握液相色譜柱柱效測定方法
二、基本原理
高效液相色譜法是以液體作為流動相的一種色譜分析法,它亦是根據(jù)不同組分在流動相和固定相之間的分配系數(shù)的差異來對混合物進行分離的。氣相色譜中評價色譜柱柱效的方法及計算理論塔板數(shù)的公式同樣適合于高效液相色譜,即:
式中:tR為組分的保留時間
Y1/2為色譜峰的半峰寬度
Y為色譜峰的峰底寬度
三、儀器和試劑
1.KLC321型高效液相色譜儀(紫外檢測器)
2.FJ-2000色譜工作站
3.25μl微量進樣器
4.超聲波清洗器
5.試劑:苯、萘、聯(lián)苯、甲醇均為分析純;純水為重蒸的去離子水。
配制成含苯、萘、聯(lián)苯各10μl/ml 的甲醇溶液。
四、實驗條件
1.色譜柱 長15cm,內徑 3mm,裝填10mm的C-18烷基鍵合固定相
2.流動相 甲醇:水(85:15),流量0.8ml/min
3.紫外光度檢測器 波長254nm,靈敏度0.08
4.進樣量 5μl
五、實驗步驟
1.將配制好的流動相置于超聲波清洗器上脫氣約30min。
2.根據(jù)實驗條件,按儀器操作步驟將儀器調節(jié)至進樣狀態(tài),待儀器流路及電路系統(tǒng)達到平衡,色譜工作站之“采樣系統(tǒng)”基線平直時,即可進樣。
3.吸取5μl苯、萘、聯(lián)苯的甲醇溶液進樣,并用色譜工作站記錄色譜數(shù)據(jù),同時記錄色譜數(shù)據(jù)文件名。
4.用色譜工作站之“數(shù)據(jù)處理”系統(tǒng)處理數(shù)據(jù)文件。
六、數(shù)據(jù)記錄及處理
1.記錄實驗條件。
(1)色譜柱與固定相
(2)流動相及其流量、柱前壓
(3)檢測器及其靈敏度
(4)進樣量
2.記錄色譜峰的保留時間tR和相應色譜峰的半峰寬Y1/2。
3.分別計算苯、萘、聯(lián)苯在該色譜柱上的理論塔板數(shù)n。
七、思考題
1.由本實驗計算出的各組分理論塔板數(shù)說明什么問題?
2.紫外光度檢測器是否適用于檢測所有有機化合物,為什么?
1.了解高效液相色譜儀的基本結構和工作原理
2.學習高效液相色譜儀的使用
3.學習、掌握液相色譜柱柱效測定方法
二、基本原理
高效液相色譜法是以液體作為流動相的一種色譜分析法,它亦是根據(jù)不同組分在流動相和固定相之間的分配系數(shù)的差異來對混合物進行分離的。氣相色譜中評價色譜柱柱效的方法及計算理論塔板數(shù)的公式同樣適合于高效液相色譜,即:
式中:tR為組分的保留時間
Y1/2為色譜峰的半峰寬度
Y為色譜峰的峰底寬度
三、儀器和試劑
1.KLC321型高效液相色譜儀(紫外檢測器)
2.FJ-2000色譜工作站
3.25μl微量進樣器
4.超聲波清洗器
5.試劑:苯、萘、聯(lián)苯、甲醇均為分析純;純水為重蒸的去離子水。
配制成含苯、萘、聯(lián)苯各10μl/ml 的甲醇溶液。
四、實驗條件
1.色譜柱 長15cm,內徑 3mm,裝填10mm的C-18烷基鍵合固定相
2.流動相 甲醇:水(85:15),流量0.8ml/min
3.紫外光度檢測器 波長254nm,靈敏度0.08
4.進樣量 5μl
五、實驗步驟
1.將配制好的流動相置于超聲波清洗器上脫氣約30min。
2.根據(jù)實驗條件,按儀器操作步驟將儀器調節(jié)至進樣狀態(tài),待儀器流路及電路系統(tǒng)達到平衡,色譜工作站之“采樣系統(tǒng)”基線平直時,即可進樣。
3.吸取5μl苯、萘、聯(lián)苯的甲醇溶液進樣,并用色譜工作站記錄色譜數(shù)據(jù),同時記錄色譜數(shù)據(jù)文件名。
4.用色譜工作站之“數(shù)據(jù)處理”系統(tǒng)處理數(shù)據(jù)文件。
六、數(shù)據(jù)記錄及處理
1.記錄實驗條件。
(1)色譜柱與固定相
(2)流動相及其流量、柱前壓
(3)檢測器及其靈敏度
(4)進樣量
2.記錄色譜峰的保留時間tR和相應色譜峰的半峰寬Y1/2。
3.分別計算苯、萘、聯(lián)苯在該色譜柱上的理論塔板數(shù)n。
七、思考題
1.由本實驗計算出的各組分理論塔板數(shù)說明什么問題?
2.紫外光度檢測器是否適用于檢測所有有機化合物,為什么?