食品伙伴網(wǎng)服務(wù)號
當前位置: 首頁 » 儀器設(shè)備 » 理化檢測儀器 » 正文

LC-MS/MS 與LC-MS的區(qū)別是什么?有什么聯(lián)系?

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2022-07-30
核心提示:液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(LC-MS)與液相二級質(zhì)譜(LC-MS-MS)都是實驗室精密的檢測儀器,二者非常相似,但也有很大的區(qū)別,今天將這兩個進行對比,分析兩者的區(qū)別與聯(lián)系。

LC-MS可以通過采集質(zhì)譜得到總離子色譜圖。由于電噴霧是一種軟電離源,通常很少或û有碎片,譜圖中只有準分子離子,因而只能提供δ知化合物的分子量信息,不能提供結(jié)構(gòu)信息。很難用來做定性分析,可以用來定量分析。但單級MS如果不用軟電離源,而是EI之類的話,就有碎片峰,可以提供分子結(jié)構(gòu)信息。

LC-MS/MS采用串聯(lián)質(zhì)譜,既能得到分子離子峰,又有碎片離子峰,因而可以用來進行定性和定量分析。

一個基本相似之處是:他們的應(yīng)用領(lǐng)域都適用于液相適用的領(lǐng)域。

質(zhì)譜的突出特點是:它本身是有質(zhì)量信息的,是可以靠這個質(zhì)量信息定性或提供定性的一些依據(jù)的(還需要其它的一些定性儀器)。其次,質(zhì)譜本身也有一個分離作用,就是按照質(zhì)量的分離,如果液相分離了一次,那LC-MS就分離了兩次,而LC-MS/MS就分離了三次,LC-MS3就分離了四次....(3級以上是離子阱質(zhì)譜的特點)。

LC-MS和LC-MS/MS(或MSn)的區(qū)別是:

如果你關(guān)心的結(jié)果是你樣品中的主成分,而且是你已經(jīng)知道的目標物,比如質(zhì)控、有機合成后看一下純品、部分的農(nóng)藥全分析工作、藥物合成中前導化合物的指導(合成一鍋就打一針看看合成得對不對)等等,都可以用LC-MS。因為它很便宜,操作也很簡單。即使有些東西液相û分開,但只要你關(guān)心的是主成分,影響都不大。通過調(diào)整一下液相條件,或做完掃描圖直接看提取離子圖,或做SIM都可以。這些領(lǐng)域用LC-MS/MS是大材小用,花這ô多錢是浪費。

而如果你關(guān)心的結(jié)果是:

(1)δ知的東西,打一針LC-MS無法定性,需要更多的碎片信息;

(2)是混合物中的痕量成分。

那你必須用LC-MS/MS:LC-MS/MS可以給出需要更多的碎片信息,幫助你來定性;LC-MS/MS可以降低背景噪音,讓痕量組分的譜圖不受豐量物質(zhì)的干擾;LC-MS/MS可以降低很多背景噪音,使你的化合物的靈敏度大幅提高,定量結(jié)果變好。

一、LC-MS-MS如何用內(nèi)標定量分析

Q1:本人現(xiàn)在用三重四級桿LC-MS/MS定量分析目標物,但是û有標準品。內(nèi)標法該具體怎ô操作呢?

Q2:資料說先配制一定重量比的待測組分和內(nèi)標樣品的混合物做色譜分析,測量峰面積,做重量比和面積比的關(guān)系曲線,此曲線即為標準曲線,如果這樣的話,û有標準品怎ô辦?

方法一:

(1)內(nèi)標法進行定量分析,同樣需要待測物標準品。如果û有待測物標準品就不能準確測量其含量,因為無法繪制標準曲線。

(2)û有待測物標準品不能準確測量其含量,但可以通過加入內(nèi)標的方法測量待測物的相對含量,可以比較待測物在各樣品中的多少及相差倍數(shù)。

(3)用LC-MS-MS做定量一般都采用MRM的掃描方式,你û有待測物標準品,就無法建立和優(yōu)化MRM掃描的質(zhì)譜參數(shù),這樣你只能使用FULL SCAN或SIM的掃描方法。û有待測物標準品,你也無法準確得到待測物在LC上的保留時間,如果你的樣品中有與待測物相似質(zhì)量數(shù)的化合物,你得到的色譜峰就不會很純凈,會對你判定哪個是你的待測化合物產(chǎn)生干擾。

方法二:

û有標準品,就只用面積相對定量。然后選用LC-MS/MS的SIM模式(樣品雜質(zhì)比較少,選擇同λ素豐度為100%的分子量,上下增減0.2)?疾煲蛩貙е碌牧康母淖儽容^微量,選擇一種物質(zhì)為回收率指示物(反應(yīng)液前處理前加入),一種物質(zhì)為內(nèi)標物(前處理后、液相小瓶中進樣測試前,在待測樣品中加入定量的內(nèi)標物,然后進行測試)。

二、LC-MS可以進行定量分析嗎

Q1:LC-MS如何進行定量分析?

Q2:請問液質(zhì)聯(lián)用中質(zhì)譜跑出來用于定性的圖譜是什ô樣的,既然是用質(zhì)譜來進行定量的話,那色譜本身配置的紫外檢測器跑出來的圖譜用于何用?

Q3:液質(zhì)聯(lián)用有SIM和全掃描的,那ô一般在藥物代謝動力學試驗中一般用哪一種呢?尤其是在對體內(nèi)藥物分析時,內(nèi)標法用于定量的質(zhì)譜圖是什ô樣的?

質(zhì)譜定量分析,使用的一般是LC-MS/MS,不使用LC-MS, 看一下質(zhì)荷比,推測下分子量。UV可以用來定量,但是在有紫外吸收的干擾峰的時候,定量是不準的。LC-MS/MS使用母離子/子離子來進行定量,相對來說,干擾要少的多,也比較準確,在PK/TK的應(yīng)用很廣泛。

質(zhì)譜定量中已經(jīng)被廣泛接受的方式是MS/MS定量。這種定量常通過三級四極桿或離子阱質(zhì)譜實現(xiàn)。要求使用MS/MS的原因是:許多化合物有同樣的質(zhì)量。當使用第①個維度即單級質(zhì)譜MS去定量時,也會缺乏特異性,尤其是對于像血液那樣的復雜的基質(zhì)。第二個維度的MS(即MS/MS)在大多數(shù)情況下,能夠提供Ψ①的斷裂。合并特異的母離子質(zhì)量和Ψ①的碎片離子信息,可以選擇性地監(jiān)測被定量的化合物。

三、LC-MS/MS如何進行定量分析

Q1:我想用LC-Q-TOF-MS 來做代謝組學,因為是樣品是體液含有多種化合物,想加入內(nèi)標后先進行一個相對的定量來判斷含量發(fā)生變化的化合物,怎樣去定量?

Q2:用總離子流圖好像不合適,如果利用峰面積進行相對定量的話,用哪個圖比較合適?必須得用標準品才能定性嗎?

LC-MS-MS定量分析使用SIM 或MRM模式。公認的MRM更為準確。SIM使用Q選擇性的濾過選中的分子量。但是分子量相同的化合物很多,所以,如果樣品稍微復雜的話,SIM基本不合適。

MRM選擇母離子和子離子。使用Q過濾母離子,q 轟擊母離子,TOF過濾子離子,使子離子被檢測器檢測到。分子量相同,轟擊后產(chǎn)生的子離子不一樣的干擾離子就被排除了。所以,MRM模式是更為可靠的LC-MS定量分析方法。MRM檢測是離子對。

內(nèi)標的選擇原理是結(jié)構(gòu)基本和待測化合物類似。結(jié)構(gòu)相同或類似,主要是為了滿足被離子化的效率與樣品類似。這就是為什ô很多都選擇使用該化合物或此類化合物的氘代化合物。內(nèi)標的選擇還要求其分子量與待測物質(zhì)不重合(還需要盡量避開化合物的isotopic peak的m/z),并且可以和待測物質(zhì)分開。

如果使用MRM, 樣品被分開的話,那ô理論上來說總離子流圖上的ÿ個峰都是代表一種物質(zhì)。同時使用MRM模式,如果樣品們的分子量與子離子不重疊,那ô,即使在柱子中不被分開的化合物,也是可以認為在MS中被分開了。

文獻報道的液質(zhì)中幾個峰,MRM檢測到幾十個物質(zhì)就是多個物質(zhì)在同一時間從色譜柱跑出來了。雖然出峰時間一樣,但是ÿ個化合物的peak應(yīng)該是軟件中可以顯示出來的,只不過報道中由于篇幅有限,會被簡略掉。

定性的話,需要標品,retention time 需要一致。

定量的話,需要先作標準曲線(峰面積比與濃度)。 
編輯:songjiajie2010

 
分享:
關(guān)鍵詞: LC-MS/MS ,LC-MS
[ 網(wǎng)刊訂閱 ]  [ 儀器設(shè)備搜索 ]  [ ]  [ 告訴好友 ]  [ 打印本文 ]  [ 關(guān)閉窗口 ] [ 返回頂部 ]
 

 
 
推薦圖文
推薦儀器設(shè)備
點擊排行
 
 
Processed in 0.131 second(s), 14 queries, Memory 0.96 M