​抑菌圈

抑菌圈(Zone of inhibition)是福萊明發(fā)現(xiàn)青霉素的過程中，提出的一個詞匯。他發(fā)現(xiàn),接種了青霉的培養(yǎng)皿中，青霉的周圍不生長細菌,而在遠離青霉的地方有細菌生長。不生長細菌的地方，是一個以青霉菌落為圓心的一個規(guī)則的圓，這個圓圈被福萊明稱為抑菌圈。

后來，福萊明發(fā)現(xiàn)，這個抑菌圈的出現(xiàn)與青霉分泌的青霉素有關(guān)，青霉素有殺菌的作用，將青霉周圍一定范圍內(nèi)的細菌全部殺死，所以形成了一個以青霉為圓心的沒有細菌生長的抑菌圈。

抑菌圈直徑大小以 mm 作為計量單位。

抑菌圈法

常用于抗生素產(chǎn)生菌的分離篩選。工具菌采用抗生素的敏感菌。若被檢菌能分泌某些抑制工具菌生長的物質(zhì)，如抗生素等，便會在該菌落周圍形成工具菌不能生長的抑菌圈，很容易被鑒別出來。

抑菌圈實驗說明

抑菌圈法是衡量殺菌防霉劑效果的一種方式，主要用于測定殺菌防霉劑對細菌、霉菌、酵母菌的抑菌作用，是定性或半定量的方法。通過殺菌防霉劑在瓊脂平板上的擴散能力來初步篩選更有效的殺菌防霉劑品種。

用具和材料

霉菌培養(yǎng)皿，無菌吸管（或針筒），圓片濾紙（直徑50px），帶玻璃珠的無菌水，帶過濾漏斗的三角牌，鑷子，接種針（環(huán)），熔化狀態(tài)的瓊脂培養(yǎng)基（最好保溫于45℃左右水浴中），一定濃度的藥劑，供試驗用的菌種。

試驗過程

1.用接種環(huán)挑取各試管斜面的菌種于帶玻璃珠的無菌水中，用手振蕩數(shù)分鐘使孢子分散，過濾后制成混合孢子懸液。

2.用無菌吸管（或針筒）向各培養(yǎng)皿中注入一定濃度的混合孢子懸浮液0.5mL。

3.向各培養(yǎng)皿內(nèi)注入15Ml~20ml的熔化狀瓊脂培養(yǎng)基（約45℃），將菌液與培養(yǎng)基混合均勻，待其冷卻。

4.用鑷子將圓片濾紙在不同濃度的防霉劑中浸漬片刻，取出置于帶菌培養(yǎng)基平板的中央，蓋上蓋子

5.置適宜溫度下，培養(yǎng)2~3d，觀察濾紙片圓片周圍抑菌圈的有無及大小。

注意事項

1.所有的操作用具和材料都要事先做滅菌處理，操作必須在無菌室（或無菌箱）內(nèi)于火焰旁進行。

2.霉菌、細菌、酵母菌等各種微生物都必須分別配置混合菌液，即這里指的混合菌液是霉菌或酵母菌等諸種菌的分別混合液，并非霉菌、細菌和酵母菌的混合液。

3.混合菌液的濃度一般為106~108cfu/mL.

4.倒入培養(yǎng)皿的瓊脂培養(yǎng)基溫度不能太高（一般為45℃左右），否則會引起微生物死亡。也不能太低，因為瓊脂會很快凝結(jié)，以致攪拌不均勻，影響試驗結(jié)果。

5.各種微生物的最適生長溫度不同（例如霉菌一般為25~30℃，細菌一般為32~37℃等），恒溫培養(yǎng)時宜分開放置。

結(jié)果評判

由于濾紙圓片所吸附的藥液慢慢向四周擴散，因此在濾紙片的周圍就出現(xiàn)清晰的抑菌圈（加入該防霉劑對供試菌有抑制效果）。抑菌圈的大小代表藥劑抗菌力的高低。在一定的藥劑濃度范圍內(nèi)，藥劑的濃度越高則抑菌圈的直徑越大。此法同樣適合于測定單個菌的抗菌效果。