1.配制溶液

向容器內(nèi)加入所需水量的一部分，按照培養(yǎng)基的配方，稱取各種原料，依次加入使其溶解，最后補(bǔ)足所需水分，對蛋白胨、肉膏等物質(zhì)，需加熱溶解，加熱過程所蒸發(fā)的水分，應(yīng)在全部原料溶解后加水補(bǔ)足。

配制固體培養(yǎng)基時(shí)，先將上述已配好的液體培養(yǎng)基煮沸，再將稱好的瓊脂加入，繼續(xù)加熱至完全融化，.并不斷攪拌，以免瓊脂糊底燒焦。

2.調(diào)節(jié)pH值

用pH試紙(或pH電位計(jì)、氫離子濃度比色計(jì))測試培養(yǎng)基的pH值，如不符合需要，可用10%HCl或10%NaOH進(jìn)行調(diào)節(jié)，直到調(diào)節(jié)到配方要求的pH值為止。

3.過濾

用濾紙、紗布或棉花趁熱將已配好的培養(yǎng)基過濾。用紗布過濾時(shí)，最好折疊成六層，用濾紙過濾時(shí)，可將濾紙折疊成瓦棱形，鋪在漏斗上過濾。

4.分裝

已過濾的培養(yǎng)基應(yīng)進(jìn)行分裝。如果要制作斜面培養(yǎng)基，須將培養(yǎng)基分裝于試管中。如果要制作平板培養(yǎng)基或液體、半固體培養(yǎng)基，則須將培養(yǎng)基分裝于錐形瓶內(nèi)。分裝時(shí)，一手捏松彈簧夾，使培養(yǎng)基流出，另一只手握住幾支試管或錐形瓶，依次接取培養(yǎng)基。分裝時(shí)，注意不要使培養(yǎng)基粘附管口或瓶口，以免浸濕棉塞引起雜菌污染。裝入試管的培養(yǎng)基量，視試管和錐形瓶的大小及需要而定。一般制作斜面培養(yǎng)基時(shí)，每只15×150毫米的試管，約裝3-4毫升(1/4-1/3試管高度)，如制作深層培養(yǎng)基，每只20×220毫米的試管約裝12-15毫升。每只錐形瓶裝入的培養(yǎng)基，一般以其容積的一半為宜。

5.加棉塞

分裝完畢后，需要用棉塞堵住管口或瓶口。堵棉塞的主要目的是過濾空氣，避免污染。棉塞應(yīng)采用普通新鮮、干燥的棉花制作，不要用脫脂棉，以免因脫脂棉吸水使棉塞無法使用。制作棉塞時(shí)，要根據(jù)棉塞大小將棉花鋪展成適當(dāng)厚度，揪取手掌心大小一塊，鋪在左手拇指與食指圈成的圓孔中，用右手食指插入棉花中部，同時(shí)左手食指與姆指稍稍緊握，就會形成1個(gè)長棒形的棉塞。棉塞作成后，應(yīng)迅速塞入管口或瓶口中，棉塞應(yīng)緊貼內(nèi)壁不留縫隙，以防空氣中微生物沿皺折侵入。棉塞不要過緊過松，塞好后,，以手提棉塞、管、瓶不下落為合適。棉塞的2/3應(yīng)在管內(nèi)或瓶內(nèi)，上端露出少許棉花便于拔取。塞好棉塞的試管和錐形瓶應(yīng)蓋上厚紙用繩捆札，準(zhǔn)備滅菌。

6.制作斜面培養(yǎng)基和平板培養(yǎng)基

培養(yǎng)基滅菌后，如制作斜面培養(yǎng)基和平板培養(yǎng)基，須趁培養(yǎng)基未凝固時(shí)進(jìn)行。

(1)制作斜面培養(yǎng)基。在實(shí)驗(yàn)臺上放1支長0.5-1米左右的木條,厚度為1厘米左右，將試管頭部枕在木條上，使管內(nèi)培養(yǎng)基自然傾斜，凝固后即成斜面培養(yǎng)基。

(2)制作平板培養(yǎng)基。將剛剛滅過菌的盛有培養(yǎng)基的錐形瓶和培養(yǎng)皿放在實(shí)驗(yàn)臺上，點(diǎn)燃酒精燈，右手托起錐形瓶瓶底，左手拔下棉塞，將瓶口在酒精燈上稍加灼燒，左手打開培養(yǎng)皿蓋，右手迅速將培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿中，每皿約倒入10毫升，以鋪滿皿底為度。鋪放培養(yǎng)基后放置15分鐘左右，待培養(yǎng)基凝固后，再5個(gè)培養(yǎng)皿一疊，倒置過來，平放在恒溫箱里，24小時(shí)后檢查，如培養(yǎng)基末長雜菌，即可用來培養(yǎng)微生物。