TTC:俗稱紅四氮唑,學(xué)名2,3,5-三苯基氯化四氮唑,化學(xué)式如下:
從事微生物檢測的朋友都知道,在菌落總數(shù)的檢測時(shí),經(jīng)常添加這種物質(zhì),可以起到兩方面的作用:其一,可以使菌落顯紅色,便于區(qū)分菌落和雜質(zhì),更利于計(jì)數(shù);其二,可以有效的防止平板上的菌落蔓延情況。這兩種作用的原理是不同的,TTC溶于水是無色的,而嗜中溫性需氧菌在新陳代謝過程中產(chǎn)生的琥珀脫氫酶可以使無色的TTC被還原成紅色的TPF,使菌落顯色,這是顯色的原理;同時(shí)TTC還具有抑制某些革蘭氏陽性菌生長的作用,因此會防止菌落蔓延。但既然會抑制細(xì)菌的生長,那會不會造成檢測誤差呢?其實(shí)只要合理使用,注意添加量,對檢測結(jié)果的影響并不是很大,是可以忽略不計(jì)的。
有專家對此做過實(shí)驗(yàn),實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明培養(yǎng)基內(nèi)TTC濃度在0.0003%-0.001%(w/v)的范圍內(nèi)對菌落生長抑制作用不顯著,但濃度太低菌落的顯色效果并不是很好,因此推薦大家按照TTC濃度為0.0005%的量來添加就不會對檢測結(jié)果產(chǎn)生較大影響,還會使菌落顯色方便計(jì)數(shù)。為了方便大家在檢測過程中方便添加,小編特意做了一個表格,方便大家查詢:
除了添加量之外,在使用我們還應(yīng)該TTC過程中我們還應(yīng)該注意些什么呢?
要點(diǎn)一:TTC的配制過程,一定要在無菌條件下進(jìn)行。因?yàn)槲覀兣渲坪玫?span style="margin: 0px; padding: 0px; outline: 0px; max-width: 100%; font-family: Calibri; box-sizing: border-box !important; overflow-wrap: break-word !important;">TTC溶液在檢測時(shí)是直接加入到培養(yǎng)基中的,必須保證TTC溶液時(shí)無菌的,配制用水也必須是無菌水。
要點(diǎn)二:TTC具有比較強(qiáng)的光敏性,見光易分解,因此無論是TTC粉末還是配制好的TTC溶液都要注意避光冷藏保存,配制好的溶液一定要放在棕色的試劑瓶里。
要點(diǎn)三:TTC溶液要在檢測過程中直接加入滅菌完的培養(yǎng)基中,即在傾倒平皿之前加入培養(yǎng)基然后搖勻使用。盡量不要將TTC溶液加入培養(yǎng)基后一起滅菌,這樣操作會使培養(yǎng)基顏色加深,不利于顯色和計(jì)數(shù)。
要點(diǎn)四:若顯色效果不是很好,可以考慮提高一下TTC濃度,但不要超過0.001%的濃度,否則會使檢測結(jié)果出現(xiàn)比較大的偏差。
要點(diǎn)五:加TTC溶液還可以有效的控制平板上的菌落蔓延情況,若是添加試劑的主要目的是為了控制菌落蔓延,建議增加培養(yǎng)基中TTC的濃度,濃度大約0.0008%時(shí)就會起到比較好的效果,并且不會影響結(jié)果。
任何方法都會是雙刃劍,添加TTC顯色當(dāng)然也是如此,添加TTC最主要的問題就是它的抑菌作用,會造成檢測結(jié)果偏低,因此很多人不愿使用。其實(shí)若是不存在雜質(zhì)干擾或者一些特殊情況可以比較精確的計(jì)數(shù),小編也建議大家不要一昧因?yàn)轱@色之后容易計(jì)數(shù)就進(jìn)行添加,畢竟這只是在一些特殊情況下采用的非常規(guī)手段。