與其它蘑菇不同,銀耳各級(jí)菌種的生產(chǎn)是雙菌培養(yǎng),即不管制作母種、原種或種植種,在每支試管、每個(gè)菌種瓶、每個(gè)種植袋(甚至每個(gè)接種穴)中都必須讓銀耳菌絲(雙核菌絲,又稱(chēng)白毛團(tuán)或芽孢狀菌種)和伴生菌香灰菌絲在培養(yǎng)基(料)中按比例、協(xié)調(diào)地生長(zhǎng),才能培養(yǎng)出有實(shí)用價(jià)值的,可以用于實(shí)際種植的有效菌種。
為了保證銀耳生產(chǎn)上用的菌種之質(zhì)量,科研人員首先把銀耳雙核菌絲"白毛團(tuán)"、酵母狀分生孢子"芽孢"、香灰菌絲(又稱(chēng)羽毛狀菌絲、耳友菌絲)分別單獨(dú)分開(kāi)培養(yǎng),分開(kāi)保藏。只有到了制種季節(jié)才把兩種純菌種搭配起來(lái),進(jìn)行混合培養(yǎng),制成生產(chǎn)上用的各級(jí)母種、原種或種植種供各地菌種場(chǎng)或種植者使用。由此可以知道,研究單位保藏的銀耳菌種和生產(chǎn)單位使用的菌種是不同的。研究所用的銀耳菌種,可以說(shuō)是一種始祖菌種,是社會(huì)上一切生產(chǎn)種的老祖宗,育種學(xué)家們稱(chēng)之"原原種",是單一菌種的純培養(yǎng)物。這些純菌種供育種、研究專(zhuān)用,一般不對(duì)外供應(yīng)。而社會(huì)生產(chǎn)用的銀耳母種、原種和種植種則是雙菌培養(yǎng)物,即把銀耳菌絲或芽孢與香灰菌絲(子囊菌)同時(shí)接種在培養(yǎng)基中進(jìn)行混合培養(yǎng)。這樣的菌種一般只使用一次。否則在轉(zhuǎn)管時(shí)容易人為地把雙菌分開(kāi),使培養(yǎng)物中銀耳菌絲逐漸減少,絕大部分剩下香灰菌絲而致使銀耳種植失敗。下面介紹銀耳菌種的分離、制備及保藏技術(shù):
㈠ 分離技術(shù) 獲得銀耳菌種的方法主要有擔(dān)孢子彈射分離法、組織分離法和耳木分離法。
1.孢子彈射法 這是利用新鮮的、成熟的子實(shí)體自動(dòng)彈射出擔(dān)孢子來(lái)獲得純菌種的方法。取朵大、色白、無(wú)病蟲(chóng)害的新鮮銀耳作為種耳。
用無(wú)菌水漂洗銀耳數(shù)次,再用無(wú)菌紗布或吸水紙,把銀耳表面
的水分吸干。因?yàn)槎砻嫒粲斜∷畬樱銜?huì)影響銀耳擔(dān)孢子的彈射,并容易污染上雜菌。再把種耳切一小塊,以放入三角瓶或放入試管中不會(huì)碰到瓶壁或管壁為度,隨后用不銹鋼小鉤鉤住小耳片,迅速懸掛在三角瓶或試管內(nèi),同時(shí)注意勿使種耳碰到培養(yǎng)基表面,以防污染雜菌,塞上棉塞,然后放在20-25℃條件下,經(jīng)24小時(shí),從耳片上彈射出來(lái)的擔(dān)孢子,落在光滑的培養(yǎng)基表面上形成一個(gè)霧狀的孢子印。此時(shí),在無(wú)菌箱或無(wú)菌室中,將懸于瓶?jī)?nèi)的耳片取出,再塞上棉塞,移到20-25℃的室中培養(yǎng),經(jīng)2-3天,培養(yǎng)基表面就會(huì)出現(xiàn)許多乳白色、糊狀的小菌落。此系銀耳的酵母狀分生孢子。當(dāng)培養(yǎng)基上出現(xiàn)酵母狀分生孢子的菌落時(shí),為了防止和減少污染,應(yīng)盡快地進(jìn)行提純,即挑取少許沒(méi)有雜菌的銀耳酵母狀分生孢子,移入新的試管中進(jìn)行培養(yǎng)。不管銀耳擔(dān)孢子或酵母狀分生孢子都不容易萌發(fā)成菌絲,所以直接用于生產(chǎn)時(shí)有困難,目前已較少采用。不過(guò),為了獲得銀耳有性繁殖的后代,必須采用擔(dān)孢子分離法,并使之萌發(fā)成單核菌絲,然后進(jìn)行配對(duì)實(shí)驗(yàn)。
2.組織分離法 和香菇、平菇不同,銀耳組織分離法比較難操作,實(shí)用意義也不大。因?yàn)槎坏┠z質(zhì)化之后,就不容易再長(zhǎng)出菌
絲,況且段木種植的或野生的銀耳,暴露在外界的
生長(zhǎng)時(shí)間很長(zhǎng),耳片上必定會(huì)附著各種雜菌,組織分離時(shí)既不容易把附著的雜菌洗掉,又不容易用藥品進(jìn)行表面的滅菌處理,且容易導(dǎo)致銀耳和條菌同歸于盡。只有位于樹(shù)皮和木質(zhì)部之間的肥厚的耳基比較容易進(jìn)行組織分離,可以獲得銀耳的純菌絲。不過(guò)用耳基分離來(lái)的銀耳純菌絲常是鵝黃色的或橙黃色的,不是純白的,菌絲生長(zhǎng)的速度也比較慢,效果也不太理想。
3.耳木分離法 利用長(zhǎng)了銀耳子實(shí)體的段木(簡(jiǎn)稱(chēng)耳木)來(lái)進(jìn)行分離,是目前獲得有實(shí)用價(jià)值的銀耳菌種最主要的方法。
耳木分離法的主要技術(shù)是排除耳木中雜菌的干擾,防止分離時(shí)污染雜菌,必須把銀耳菌絲和香灰菌絲單獨(dú)分離出來(lái)。對(duì)初學(xué)者來(lái)說(shuō),耳木分離法是不容易掌握的,必須反復(fù)練習(xí),直到掌握分離的要領(lǐng)。耳木分離法的主要步驟如下:
(1)耳木選擇 在長(zhǎng)第一、二批銀耳時(shí),取長(zhǎng)耳最多,質(zhì)量最好(尤其是片寬、色白),雜菌最少的耳木一小段,作為分離材料。分離材料經(jīng)風(fēng)干,并用熏蒸劑驅(qū)蟲(chóng)(特別是螨)后,移入無(wú)菌箱或無(wú)菌室中進(jìn)行分離。
(2)耳木滅菌 先把耳木鋸成2-4cm厚的木輪,然后去掉樹(shù)皮、耳基,放入接種箱(室)中,耳木表面用0.1%升汞水或70%酒精揩擦滅菌。技術(shù)熟練者也可以不經(jīng)表面滅菌,就進(jìn)行分離。
(3)耳木取種 通過(guò)耳基著生處把耳木縱切成兩瓣。然后,在耳基著生處的正下方木材內(nèi)部剃取極小的木屑粉末(不能用小木片,接種塊越小,得到銀耳純菌種的機(jī)會(huì)越大,接種塊越大得到香灰菌絲,或香灰菌絲夾雜一點(diǎn)銀耳菌絲的機(jī)會(huì)越多),接種在試管中的培養(yǎng)基表面。接種后,把試管放在20-28℃的室溫下培養(yǎng),數(shù)天之后接種塊的周?chē)烷_(kāi)始長(zhǎng)出菌絲來(lái)。
(4)分離結(jié)果 由于分離的技巧不同,分離的結(jié)果也不一樣。大致可以得到如下幾種結(jié)果:
只得到銀耳菌絲;只得到香灰菌絲;同時(shí)得到銀耳菌絲和香灰菌絲,但香灰菌絲占絕對(duì)多數(shù);得到銀耳酵母狀分生孢子和香灰菌絲。如果有雜菌干擾,分離的結(jié)果就更復(fù)雜了。
為了獲得有生產(chǎn)價(jià)值的銀耳菌種,在分離后的第3-7天內(nèi)要天天觀察,把銀耳菌絲和香灰菌絲單獨(dú)分離出來(lái)。
銀耳菌絲的特征: 白色、淡黃白色以及由白色至黃色之間的各種中間色,氣生菌絲直立、斜立或平貼于培養(yǎng)基表面,基內(nèi)菌絲生于培養(yǎng)基里面。菌絲直徑l.5-3微米,有橫隔膜,有明顯的(但不是每個(gè)橫隔膜上都有)鎖狀聯(lián)合,生長(zhǎng)速度比一般蘑菇緩慢。在某些情況下,在培養(yǎng)基表面會(huì)出現(xiàn)纏結(jié)的菌絲團(tuán),并逐漸膠質(zhì)化,變成小原基,長(zhǎng)出小耳片。當(dāng)雙核菌絲開(kāi)始膠質(zhì)化時(shí),在菌絲頂端可以發(fā)現(xiàn)有若干擔(dān)子樣的膨大細(xì)胞,這意味著雙核菌絲已進(jìn)入結(jié)實(shí)階段。雙核菌絲繼代(移植)后或繼續(xù)長(zhǎng)出新的菌絲,或迅速膠質(zhì)化,長(zhǎng)出耳片,也可以變成粘糊糊的酵母狀分生孢子(取決于菌株的菌齡、發(fā)育程度、培養(yǎng)基表面的水層,接種針熱或冷,接種時(shí)手勢(shì)輕或重等刺激).由雙核菌絲斷裂成的"酵母狀分生孢子"在適宜條件下變成銀耳菌絲。
香灰菌絲的特征: 菌絲初無(wú)色,大量生長(zhǎng)時(shí)白色,羽毛狀, 常有特別細(xì)長(zhǎng)的主干和側(cè)生的略呈"羽毛狀"的分枝,老菌絲變淡黃色,淡棕色,培養(yǎng)基逐漸由淡褐色變?yōu)楹谏蚝趲ЬG色。培養(yǎng)基表面的氣生菌絲灰白色,細(xì)絨狀,有時(shí)有碳漬的黑疤,分生孢子梗近掃帚狀,分生孢子少見(jiàn)。若用木屑培養(yǎng)基,破瓶后可發(fā)生黃綠色至草綠色的近橢圓形的分生孢子。在段木表面可以產(chǎn)生扁平黑色的子座。已知香灰菌可能不是單一個(gè)物種,可能隸屬于碳團(tuán)屬和碳豆屬。有3-4種,其中有一種經(jīng)鑒定初步認(rèn)為是阿切爾碳團(tuán)(Hypoxylon archeri).