火箭電泳技術(shù)

（一）原理
抗原在含有抗體的凝膠中進行電泳，在電場作用下，抗原向一個方向移動，在移動的過程中，逐步與凝膠中的抗體結(jié)合而沉淀呈火箭狀。沉淀峰面積越大，說明抗原量越多，二者呈正相關(guān)，因此可用于抗原的定量測定。此法具有敏感性高、快速等優(yōu)點。
（二）材料與試劑
1．0.05mol/L pH8.6巴比妥緩沖液配成2％的瓊脂。
2．抗原與抗體
3．其它材料同免疫電泳。
（三）操作方法
1．將2％瓊脂煮沸溶化后，放入60℃水浴箱中。
2．將適量的抗體用0.05mol/L pH8.6巴比妥緩沖液稀釋至瓊脂同樣的體積量，放入60℃水浴。
3．將兩者充分混合，立即倒成平板。
4．瓊脂板冷卻后在一側(cè)打孔，孔徑3mm，孔距6mm。
5．于孔內(nèi)分別加入不同濃度的定量抗原。
6．電泳 孔端接負板。電流強度3mA/cm（或電壓10V/cm），電泳時間2h~10h。
7．停止電泳，將瓊脂板于生理鹽水中浸泡24h，中間換液數(shù)次。
8．染色、脫色、干燥同免疫電泳。
9．抗體最適量的測定 將已知抗原與抗體以不同濃度梯度進行方陣試驗，找出所形成的火箭狀沉淀線，輪廓清晰，前端尖窄而閉合的抗體最小量作為抗體的最適用量。
10．標準曲線的繪制 以抗體的最適用量制成瓊脂板，分別用已知的不同濃度抗原（同一濃度的也必須做一批，以求平均值）進行電泳，泳畢后染色，測其沉淀峰的高度（或面積），然后以抗原量為縱軸，沉淀峰高度（或面積）為橫軸，制成標準曲線。
11．對照組的設(shè)置 在測未知抗原的同時，必須設(shè)置已知標準抗原作為電泳對照。
（四）結(jié)果判定
在已知標準抗原所形成的沉淀峰的高度，在許可的誤差范圍內(nèi)，測其待測抗原所形成的沉淀峰的高度（或面積），然后從標準曲線中查出它們相應(yīng)的抗原含量。
（五）注意事項
1．抗原抗體的用量應(yīng)當(dāng)預(yù)試，抗原太濃，在一定時間內(nèi)不能達到最高峰，抗體太濃，則沉淀峰太低而無法測量。預(yù)試峰的合適高度為2cm~5cm。
2．用優(yōu)質(zhì)瓊脂糖。
3．一定條件下，電泳時間要根據(jù)峰的形成情況而定。如形成尖角峰形，表示已無游離抗原。如呈鈍圓形，前面有云霧狀，表示還未到終點。
4．把瓊脂板置于電泳槽上搭好橋，再加抗原，或啟動電源后，電壓極低時加樣，以免造成基部過寬的峰型。