交叉電泳技術(shù)

（一）原理
交叉免疫電泳是把瓊脂平板電泳和火箭電泳結(jié)合起來的一種方法。先將抗原樣品在瓊脂凝膠中進行電泳分離，然后使已分開的各抗原成分與原泳動方向呈90度角的方向泳向含抗體的瓊脂凝膠中，于是該抗原樣品中的各個抗原成分和它相對應(yīng)的抗體依次形成若干錐形沉淀線，根據(jù)沉淀線的位置及面積（或高度）可確定該抗原的質(zhì)和量。
此試驗可以用來鑒定抗原，即與標(biāo)準(zhǔn)抗原抗體系統(tǒng)相比較，就可知待測樣品中抗原的質(zhì)和量。此法也可以鑒定抗體，把未知的含抗體的樣品與標(biāo)準(zhǔn)抗原反應(yīng)，所得的結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)的抗原、抗體反應(yīng)結(jié)果比較，從而可以確定其中所含抗體成分及其滴度。
（二）試劑及材料
1．巴比妥緩沖液 0.05mol/L pH8.2。
2．1％瓊脂糖或優(yōu)質(zhì)瓊脂 以巴比妥緩沖液配制。
3．pH7.2 PBS液
4．抗原
5．抗體
6．電泳儀、玻板、吸管、滴管等。
（三）操作方法
1．取10cm×10cm的潔凈玻板，加1％溶化瓊脂糖10ml，鋪勻、冷凝。
2．打孔，在距陰極端2cm，玻板邊2.2cm處，打孔。
3．將一定濃度的抗原加入孔內(nèi)，將抗原孔置于負極，電泳。電壓10V/cm，泳動1h。
4．電泳結(jié)束后，切除非抗原電泳部分的瓊脂（約6cm×10cm）。
5．取上述1％溶化的瓊脂糖10ml放入60℃水浴中，加入預(yù)熱的適當(dāng)濃度的血清抗體
迅速混勻，鋪入切去的瓊脂部分。冷卻后，用不含抗體瓊脂密封切口。
6．將玻板與原電泳方向成90度角放置，使泳動后的抗原凝膠置于負極，電泳。電壓為3V/cm，泳動10h~20h。
7．漂洗、染色、脫色、烘干。
（四）結(jié)果判定
與標(biāo)準(zhǔn)抗原抗體錐形沉淀線比較，判定和分析結(jié)果。
（五）注意事項
1．抗原抗體的最適稀釋度必須事先摸索好。
2．第二次電泳時間的長短以觀察錐形沉淀線的出現(xiàn)為準(zhǔn)。電泳時間長短不一，短的可2h即出現(xiàn)。